下调microRNA-10b通过靶向调控CEBPα表达促进脂肪干细胞的成骨分化

发布时间：2023-03-21 19:34

　　目的探讨下调microRNA-10b(miR-10b)对小鼠脂肪干细胞(ADSCs)成骨分化的影响。方法分离培养小鼠ADSCs,对其进行细胞形态学及流式细胞术鉴定;应用脂质体稳定转染法转染小鼠ADSCs,将转染miR-10b inhibitor、si-CEBPα及miR-10b inhibitor+si-CEBPα的ADSCs依次设为miR-10b inhibitor组、si-CEBPα组及miR-10b inhibitor+si-CEBPα组;同时将上述对应的阴性对照序列转染入ADSCs中,分别记为miR-NC组、si-NC组及miR-NC+si-NC组,正常对照组(control组)为无任何特殊处理的ADSCs;采用RT-PCR法检测转染后ADSCs中miR-10b的表达;生物信息学预测miR-10b与CEBPα的靶向关系,并采用双荧光素酶基因报告实验、实时荧光定量PCR及Western blot验证两者的靶向关系;利用茜素红染色及碱性磷酸酶(ALP)活性检测实验明确miR-10b对小鼠ADSCs成骨分化的影响及CEBPα在其中的作用。结果与control组和miR-NC组相比,m...

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【文章目录】：
1 材料及方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验动物
        1.1.2 主要试剂
    1.2 方法
        1.2.1 小鼠ADSCs的分离培养
        1.2.2 小鼠ADSCs的鉴定
        1.2.3 细胞转染及分组
        1.2.4 实时荧光定量PCR(RT-PCR)
        1.2.5 双荧光素酶基因报告实验
        1.2.6 Western blot检测
        1.2.7 小鼠ADSCs体外诱导成骨分化
        1.2.8 碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 小鼠ADSCs的形态及鉴定
    2.2 转染miR-10b inhibitor后ADSCs中miR-10b mRNA的表达
    2.3 miR-10b与CEBPα在ADSCs中的靶向关系及验证
    2.4 miR-10b对ADSCs成骨分化的影响
    2.5 CEBPα在miR-10b对ADSCs成骨分化影响中的作用
3讨论



本文编号：3767165