不同外源基因拷贝数背景CHO细胞的宿主细胞蛋白种类的研究

发布时间：2023-03-27 00:17

　　目的研究外源基因拷贝数、生产工艺、细胞多样性对宿主细胞蛋白表达的影响。方法构建空载体CHO K1细胞株,检测其外源基因拷贝数,根据拷贝数的低、中、高对细胞进行分类。使用不同的生产工艺测试低拷贝、中等拷贝和高拷贝的细胞群,观察其宿主细胞蛋白表达之间的差异。最后将三个拷贝数水平的细胞群进行混合,再生产,观察其混合表达的宿主细胞蛋白与单独生产时表达宿主细胞蛋白的差异。结果研究结果显示,不同拷贝数背景的细胞群之间表达宿主细胞蛋白相差6%～13%。相同的细胞进行不同的工艺生产时,也因为基础培养基和补料的不同而使宿主细胞蛋白的种类不同。细胞多样性增加并不能引起宿主细胞蛋白表达的种类增多。结论宿主细胞蛋白的表达与外源基因拷贝数、生产工艺以及细胞群的多样性有关。

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 材料来源
        1.1.2 试剂和仪器
    1.2 方法
        1.2.1 表达外源基因的CHO K1空载体细胞株的建立
        1.2.2 外源基因相对拷贝数的检测
        1.2.3 不同生产工艺针对不同拷贝数背景的细胞群进行宿主细胞蛋白的生产
        1.2.4 不同多样性细胞群进行宿主细胞蛋白的生产
        1.2.5 宿主细胞蛋白种类的分析与对比
2 结果
    2.1 表达空载体CHO K1细胞群的筛选
    2.2 不同拷贝数背景的细胞群建立
    2.3 不同生产工艺的批次补料实验
    2.4 细胞多样性
3 讨论



本文编号：3771985