新型提高重组CHO细胞转基因表达MARs的筛选与功能分析

发布时间：2023-04-11 01:22

　　背景利用基因工程技术生产的治疗性重组蛋白已经成为生物医药产业重要组成部分。哺乳动物表达系统是生产治疗性重组蛋白的主要平台,在哺乳动物表达系统中应用最为广泛的是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)表达系统。但是CHO细胞表达系统存在转基因沉默或表达水平不稳定等问题。研究发现核基质附着区(matrix attachment regions,MAR)作为一种表观遗传调控元件,不仅能够克服转基因沉默而且能提高转基因表达水平。但目前报道的用于提高转基因表达的MAR序列有限,并且其调控转基因表达的作用机制和分子特征尚不清楚。目的筛选出能有效提高转基因表达的新型MAR序列,用于CHO细胞中提高转基因表达水平并分析其作用机制及分子特征。方法1.载体构建和细胞转染:人工合成human CSP-B MAR(本文称为hu-MAR)、MAR-6(本文称为MAR1)和DHFR intron MAR(本文称为MAR2)序列,将不同MAR序列分别克隆至含绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,eGFP)表达载体的poly A下游。将构建...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一节 新型MARs在 CHO细胞中对报告基因e GFP表达的影响及机制研究
    1 材料
    2 方法
    3 结果
    4 小结
第二节 新型MARs在 CHO细胞中对重组蛋白贝伐单抗表达的影响
    1 材料
    2 方法
    3 结果
    4 小结
讨论
结论
参考文献
综述:哺乳动物表达系统高效表达载体构建策略
    参考文献
附录
攻读学位期间发表文章情况
致谢
个人简历



本文编号：3789071