甘蔗SoInvInh2基因克隆及其在转基因拟南芥中的表达分析

发布时间：2023-05-07 00:35

　　转化酶抑制子(InvInh)是转化酶翻译后水平的一个重要调控因子,通过与转化酶结合成复合物来抑制转化酶酶活性。为了探究甘蔗SoInvInh2基因的功能特性,本研究以甘蔗品种GT28叶片总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增甘蔗SoInvInh2基因的编码区序列,以中间载体pMD18-T和表达载体pRI101-AN为基础,采用酶切和连接的方法,构建植物正义表达载体。通过花序轴浸染法转化拟南芥,获得转SoInvInh2基因拟南芥株系。经kan抗性筛选和PCR扩增检测,共获得12株阳性植株,转化效率为9.7%。半定量RT-PCR分析结果表明SoInvInh2基因在转基因拟南芥叶中相对表达量最高,根中次之,叶柄中最低。这将为后续解析甘蔗SoInvInh2基因的功能提供理论参考。

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 结果与分析
    1.1 克隆获得甘蔗SoInvInh2基因且已构建表达载体
    1.2 获得转SoInvInh2基因拟南芥
    1.3 转SoInvInh2基因拟南芥半定量PCR扩增的退火温度为60.1℃
    1.4 转SoInvInh2基因拟南芥半定量PCR扩增的循环数为30次
    1.5 转SoInvInh2拟南芥基因表达分析
2 讨论
3 材料与方法
    3.1 试验材料
    3.2 甘蔗转化酶抑制子SoInvInh2基因的克隆
    3.3 SoInvInh2植物表达载体的构建
    3.4 采用花序轴浸染法进行遗传转化
    3.5 转基因拟南芥植株的筛选和鉴定
    3.6 转基因拟南芥半定量PCR扩增体系的优化
    3.7 转SoInvInh2拟南苗期SoInvInh2基因的表达特性分析
作者贡献



本文编号：3809905