胰高血糖素样肽-1融合蛋白在原核系统中的表达

发布时间：2023-05-06 18:13

　　[目的]构建点突变的GLP-1Gly8,并与人血清白蛋白(HSA)结构域Ⅰ融合,延长GLP-1的半衰期。[方法]采用常规PCR扩增白蛋白结构域Ⅰ片段,利用SOE-PCR扩GLP-1Gly8基因并将两个基因拼接,得到的HSA-GLP-1Gly8融合基因经Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切后连接到p ET30a表达载体,重组质粒p ET30a-HSA-GLP-1Gly8转入E.coli BL21(DE3)宿主菌中进行IPTG诱导表达。[结果]PCR扩增分别获得140 bp的GLP-1Gly8基因499 bp的HSA的片段及经融合后的HSA-GLP-1Gly8基因。表达载体p ET30a-HSA-GLP-1Gly8在E.coli BL21(DE3)宿主菌中经IPTG诱导,过表达了分子量约为22 k Da的融合蛋白。[结论]成功构建了p ET30a-HSA-GLP-1Gly8原核表达载体,融合蛋白在BL21(DE3)菌中以包涵体的形式过表达。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验材料
        1.1.2 试剂
        1.1.3 仪器
    1.2 方法
        1.2.1 引物设计
        1.2.2 PCR扩增GLP-1Gly8和HSA
        1.2.3 p ET30a-HSA-GLP-1Gly8表达载体的构建
        1.2.4 重组菌生长曲线测定
        1.2.5 HSA-GLP-1Gly8融合蛋白的诱导表达
2 结果与分析
    2.1 HSA和GLP-1Gly8基因的PCR扩增
    2.2 HSA-GLP-1Gly8融合基因的PCR扩增
    2.3 p ET30a-HSA-GLP-1Gly8表达载体的构建
    2.4 重组菌的生长曲线
    2.5 HSA-GLP-1Gly8融合蛋白的表达
3 讨论
4 结论



本文编号：3809382