利用Cre-loxP系统研究细胞间mRNA的传递

发布时间：2024-07-11 04:11

　　目的利用Cre-loxP重组酶系统研究mRNA在细胞间传递过程及意义。方法构建和筛选稳定表达Cre重组酶的供体细胞及稳定表达loxP-DsRed-loxP-eGFP的受体细胞。将供、受体细胞共培养或在Transwell^TM中共培养,设置单独受体细胞组为对照,72 h后观察统计各组受体细胞eGFP阳性率,利用细胞免疫荧光细胞染色检测eGFP阳性细胞中Cre表达情况,并探讨供体细胞死亡、细胞膜纳米管、 Rho相关激酶(ROCK)信号通路对Cre mRNA传递的影响。结果将供、受体细胞共培养72 h后发现,共培养组eGFP为阳性,单独受体细胞组、 Transwell^TM共培养组eGFP均为阴性,表明细胞接触可以介导Cre mRNA传递,免疫荧光染色结果显示Cre蛋白可在受体细胞中翻译和入核。此外,Cre mRNA的传递主要通过活细胞,而膜纳米管及ROCK信号通路抑制剂可部分阻滞该过程。结论 mRNA可以通过细胞间接触在活细胞中传递,进入受体细胞后还可翻译成蛋白质发挥生物学功能。

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 重组慢病毒质粒pLVX-IRES-Neo-Cre的构建
        1.2.2 慢病毒包装和稳定转染细胞株构建
        1.2.3 单克隆细胞株的制备
        1.2.4 免疫荧光细胞化学染色检测细胞中Cre蛋白的表达和分布
        1.2.5 供、 受体细胞共培养及受体细胞中eGFP表达统计
        1.2.6 统计学分析
2 结果
    2.1 单克隆细胞株的筛选和验证
    2.2 受体细胞可以被Cre蛋白重组并表达eGFP
    2.3 细胞间直接接触介导Cre传递
    2.4 Cre mRNA在受体细胞中的翻译可介导受体细胞基因组重组
    2.5 Cre mRNA的传递不依赖mNT和死亡细胞
3 讨论



本文编号：4005229