CD36原核表达载体的构建及生物信息学分析

发布时间：2023-08-01 17:29

　　[目的]对CD36基因进行体外克隆表达,建立CD36基因cDNA在大肠杆菌中表达的实验技术以及进行CD36蛋白三级结构的预测并利用生物信息学方法进行分析。[方法]以人血液RNA为模板,RT-PCR扩增CD36的基因序列;并构建原核表达质粒pET-32a-CD36转化到大肠杆菌DE3中后,经过IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE验证。[结果]成功克隆了人CD36基因并构建出原核表达质粒,成功转入表达菌大肠杆菌DE3中后经IPTG诱导成功表达,且在1 mmol/L的诱导剂浓度下培养6 h表达量最佳。利用Phyre2和Abcpred软件预测蛋白质结构和B细胞抗原表位,B细胞抗原表位评分大于0.85的CD36的B细胞抗原表位有8个。[结论]成功建立了人CD36基因的原核表达的实验技术,并对CD36的结构及B细胞抗原表位进行了预测,为后续研究CD36基因的功能和抗体制备提供方向和奠定基础。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验材料
        1.1.2 试剂
        1.1.3 仪器
        1.1.4 培养基
    1.2 方法
        1.2.1 引物设计
        1.2.2 RNA、cDNA的获取
        1.2.3 CD36原核表达载体的构建与鉴定
        1.2.4 重组质粒双酶切鉴定及测序
        1.2.5 目的蛋白的诱导表达
        1.2.6 CD36结构及B细胞抗原表位的预测
2 结果与分析
    2.1 CD36基因的克隆
    2.2 双酶切的验证
    2.3 CD36基因表达条件的优化
    2.4 CD36蛋白的结构预测
    2.5 CD36的B细胞抗原表位的预测及分析
3 讨论
4 结论



本文编号：3838035