紫萍磷转运蛋白基因的克隆与表达研究
发布时间：2023-10-29 12:34
磷(Pi)在植物新陈代谢过程发挥重要作用,磷转运蛋白是植物转运、吸收磷的必需蛋白。紫萍在各地水域中十分常见,生命力极其旺盛,可以吸收水中的钙、氮、磷等元素,也能吸收铜、铁、镉等重金属元素。因此,克隆、开发并合理利用紫萍的磷转运蛋白基因,为研究紫萍净化水体的机理、解析紫萍高效吸收磷的分子机制并为用于促进作物高效吸收磷提供理论依据,为开发优质经济作物提供基因资源。本文以紫萍为材料,克隆得到磷转运蛋白基因并预测理化性质,研究基因在不同外界环境的表达模式。分析获得该基因上游启动子序列并预测存在的顺式作用元件,克隆4个5′端启动子缺失片段并导入转基因烟草中稳定表达。主要结论有:1.克隆紫萍磷转运蛋白基因并命名Sp PHT1。利用生物信息软件分析表明,Sp PHT1基因序列有1620 bp,无内含子区域,编码539个氨基酸。Sp PHT1蛋白分子量59.19k D,等电点8.51,有11个跨膜区,是一种稳定的疏水性蛋白,包含与MFS超家族、糖转运蛋白家族相似的结构域,而且Sp PHT1蛋白氨基酸序列与玉米、高粱、油茶、茶树等15种植物PHT1氨基酸序列有80%以上的相似性,表明Sp PHT1编码的...
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 紫萍的概述
1.1.1 紫萍的简介
1.1.2 紫萍的相关研究
1.2 植物磷转运蛋白研究进展
1.2.1 植物磷转运蛋白家族分类
1.2.2 植物磷转运蛋白不同家族的研究进展
1.3 启动子的相关研究进展
1.3.1 启动子分类及功能
1.3.2 启动子的研究方法
1.4 本研究目的、意义及内容
1.4.1 本研究目的意义
1.4.2 本研究的内容
第二章 紫萍SpPHT1基因的克隆及序列分析
2.1 引言
2.2 材料
2.2.1 植物材料
2.2.2 试剂盒、酶与引物
2.2.3 培养基配方
2.2.4 化学试剂
2.2.5 实验仪器
2.3 实验方法
2.3.1 SpPHT1基因克隆
2.3.2 SpPHT1基因序列分析
2.4 实验结果
2.4.1 实验结果电泳图
2.4.2 SpPHT1基因序列分析
2.5 讨论
第三章 紫萍SpPHT1基因在不同条件下的表达研究
3.1 引言
3.2 材料
3.2.1 植物材料
3.2.2 试剂盒、引物
3.3 实验方法
3.3.1 植物不同条件培养
3.3.2 植物RNA提取
3.3.3 紫萍荧光定量PCR的表达
3.3.4 绘制Real-Time PCR标准曲线的方法
3.4 实验结果
3.4.1 荧光定量PCR标准曲线绘制
3.4.2 紫萍SpPHT1基因在三种磷离子浓度的表达情况
3.4.3 紫萍SpPHT1基因昼夜节律表达
3.5 讨论
第四章 紫萍SpPHT1基因启动子序列分析及5′缺失片段表达载体的构建
4.1 引言
4.2 材料
4.2.1 植物材料、菌种
4.2.2 试剂盒、酶和引物
4.3 实验方法
4.3.1 生物信息学分析
4.3.2 启动子5′缺失片段克隆
4.3.3 克隆载体的构建
4.3.4 表达载体的构建
4.4 实验结果分析
4.4.1 生物信息学分析
4.4.2 实验结果电泳图
4.5 讨论
第五章 紫萍SpPHT1基因5′端缺失启动子片段在转基因烟草中的活性表达研究..
5.1 引言
5.2 材料
5.2.1 植物材料、菌种、载体
5.2.2 试剂盒、酶、抗生素和引物
5.2.3 培养基与相关试剂
5.2.4 实验仪器
5.3 实验方法
5.3.1 农杆菌的转化
5.3.2 叶盘法转化烟草
5.3.3 转基因烟草PCR检测
5.3.4 转基因烟草GUS组织化学染色法定性分析
5.3.5 转基因烟草GUS荧光定量分析
5.4 实验结果
5.4.1 转基因烟草的检验
5.4.2 GUS染色组化分析
5.4.3 GUS荧光定量分析
5.5 讨论
结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表的论文
致谢
附录
本文编号：3858088
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 紫萍的概述
1.1.1 紫萍的简介
1.1.2 紫萍的相关研究
1.2 植物磷转运蛋白研究进展
1.2.1 植物磷转运蛋白家族分类
1.2.2 植物磷转运蛋白不同家族的研究进展
1.3 启动子的相关研究进展
1.3.1 启动子分类及功能
1.3.2 启动子的研究方法
1.4 本研究目的、意义及内容
1.4.1 本研究目的意义
1.4.2 本研究的内容
第二章 紫萍SpPHT1基因的克隆及序列分析
2.1 引言
2.2 材料
2.2.1 植物材料
2.2.2 试剂盒、酶与引物
2.2.3 培养基配方
2.2.4 化学试剂
2.2.5 实验仪器
2.3 实验方法
2.3.1 SpPHT1基因克隆
2.3.2 SpPHT1基因序列分析
2.4 实验结果
2.4.1 实验结果电泳图
2.4.2 SpPHT1基因序列分析
2.5 讨论
第三章 紫萍SpPHT1基因在不同条件下的表达研究
3.1 引言
3.2 材料
3.2.1 植物材料
3.2.2 试剂盒、引物
3.3 实验方法
3.3.1 植物不同条件培养
3.3.2 植物RNA提取
3.3.3 紫萍荧光定量PCR的表达
3.3.4 绘制Real-Time PCR标准曲线的方法
3.4 实验结果
3.4.1 荧光定量PCR标准曲线绘制
3.4.2 紫萍SpPHT1基因在三种磷离子浓度的表达情况
3.4.3 紫萍SpPHT1基因昼夜节律表达
3.5 讨论
第四章 紫萍SpPHT1基因启动子序列分析及5′缺失片段表达载体的构建
4.1 引言
4.2 材料
4.2.1 植物材料、菌种
4.2.2 试剂盒、酶和引物
4.3 实验方法
4.3.1 生物信息学分析
4.3.2 启动子5′缺失片段克隆
4.3.3 克隆载体的构建
4.3.4 表达载体的构建
4.4 实验结果分析
4.4.1 生物信息学分析
4.4.2 实验结果电泳图
4.5 讨论
第五章 紫萍SpPHT1基因5′端缺失启动子片段在转基因烟草中的活性表达研究..
5.1 引言
5.2 材料
5.2.1 植物材料、菌种、载体
5.2.2 试剂盒、酶、抗生素和引物
5.2.3 培养基与相关试剂
5.2.4 实验仪器
5.3 实验方法
5.3.1 农杆菌的转化
5.3.2 叶盘法转化烟草
5.3.3 转基因烟草PCR检测
5.3.4 转基因烟草GUS组织化学染色法定性分析
5.3.5 转基因烟草GUS荧光定量分析
5.4 实验结果
5.4.1 转基因烟草的检验
5.4.2 GUS染色组化分析
5.4.3 GUS荧光定量分析
5.5 讨论
结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表的论文
致谢
附录
本文编号：3858088
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