心肌多巴胺受体表达及功能的研究

发布时间：2023-10-29 13:26

　　目的:之前我们已经证明FABP3抑制小鼠心室肌细胞的钙瞬变和收缩,并且在我们的课题组中进行了广泛的研究。但是,抑制作用的详细机制尚未完全了解。例如,尚不清楚表面受体是否参与FABP3介导的肌力作用。G蛋白偶联的多巴胺受体主要存在于中枢神经系统中,也存在于心脏中。但是,人们对心脏中多巴胺受体的生理作用知之甚少。最近,据报道FABP3结合并调节小鼠脑中2型多巴胺受体。当前的研究中,我们决定探索心脏中不同多巴胺受体的表达及其生理作用。该课题旨在揭示心脏及心肌细胞中多巴胺受体的亚型,亚细胞分布模式以及可能的生理作用。方法:1.实验动物本实验选择的动物饲养于实时监测大气压力、湿度、室温范围为23-25℃的SPF级环境中,均为自由进食进水且周龄是12-14的C57BL/6健康雄性小鼠。2.通过q RT-PCR技术来检测心房肌细胞和心室肌细胞中DRD1及DRD2基因的m RNA水平表达。3.使用蛋白印迹法检测心肌组织中的Drd1和Drd2在蛋白水平的表达。4.使用生物标记素的方法对心肌细胞中的DRD1和DRD2进行定位。5.免疫荧光方法观察DRD1以及DRD2在心肌细胞中的分布。6.通过q RT-P...

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

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前言
材料与方法
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 主要试剂
        1.3 实验仪器
        1.4 PCR引物
    2 方法
        2.1 试剂配制
        2.2 急性分离小鼠左室心肌细胞
        2.3 免疫荧光技术
            2.3.1 做免疫荧光前的细胞处理步骤
            2.3.2 洗细胞
            2.3.3 山羊血清封闭
            2.3.4 孵育一抗
            2.3.5 洗细胞
            2.3.6 孵育二抗
            2.3.7 避光洗细胞
            2.3.8 使用DAPI染料对细胞进行染色
            2.3.9 指甲油封片
            2.3.10 共聚焦显微镜下拍照
        2.4 Quantitative Real time PCR检测小鼠心肌细胞中DRD1-DRD5的m RNA表达
            2.4.1 做PCR前组织的处理
            2.4.2 总RNA的提取
            2.4.3 测量总RNA浓度
            2.4.4 反转录
            2.4.5 反应体系
            2.4.6 Real-time PCR循环参数的设置及条件的确定
        2.5 Western实验
            2.5.1 绘制蛋白浓度测量标准曲线
            2.5.2 样本蛋白处理
            2.5.3 配胶
            2.5.4 电泳
            2.5.5 转膜
            2.5.6 封闭
            2.5.7 洗膜
            2.5.8 与一抗结合
            2.5.9 洗膜
            2.5.10 与二抗结合
            2.5.11 洗膜
            2.5.12 显影
        2.6 生物素标记法
    3 统计学处理及相关分析
结果
讨论
结论
参考文献
综述 GPCR信号与心功能
    1 G蛋白偶联受体与心功能
    2 肾上腺素能受体信号与心肌收缩
    3 其他的GPCRs与心肌收缩性
    4 G蛋白、相关信号介质与心肌收缩力
    5 通过心脏G蛋白偶联受体调节心肌收缩力的药物
    6 结论/未来
    参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3858169