LRH-1对牛卵巢颗粒细胞凋亡及类固醇激素分泌的调控
发布时间：2023-11-25 04:24
LRH-1(肝脏受体同源物-1)又名NR5A2,是核受体家族的成员之一,作为转录激活子调控类固醇基因的表达,对类固醇激素的分泌及癌症因子的调控有重要作用。雌性哺乳动物的大多数卵泡都会发生闭锁,激素的调控也是卵泡闭锁的因素之一,而颗粒细胞的凋亡被认为是卵泡闭锁的主要机制,但LRH-1是否参与牛卵巢颗粒细胞的增殖凋亡调控仍需证实。越来越多研究表明孕酮受体PGR介导细胞的抗凋亡信号通路,孕酮(P4)对雌性动物生殖组织的作用也是由PGR介导的。孕酮受体信号途径参与了卵巢发情周期和黄体化,并调控机体的卵巢发育、妊娠等重要活动。同时也与一些疾病,包括阿尔茨海默症、帕金森等密切相关。但目前未见有关LRH-1介导牛卵巢颗粒细胞的凋亡的相关报道,其调控机制也是未知的。通过特异性的小分子激活剂(DLPC(Dilauroyl Phosphatidylcholine)和P4)激活LRH-1的表达和孕酮受体信号通路相关受体的表达,利用免疫组织化学、RT-qPCR、Western blot、ELISA、免疫荧光细胞法、Annexin V-FITC/PI及CCK-8等多种...
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 哺乳动物卵泡发育机制
1.1.1 卵子的发生与卵泡发育
1.1.2 卵泡的发育调控机制
1.1.3 卵泡的闭锁研究进展
1.2 LRH-1 与类固醇激素分泌
1.2.1 LRH-1 与类固醇激素的作用及机理
1.2.2 卵泡类固醇合成机制
1.3 孕酮受体信号通路对凋亡的影响
第二章 颗粒细胞培养鉴定及LRH-1 在卵巢组织中的表达定位
2.1 试验材料
2.1.1 牛卵巢的采集
2.1.2 主要试剂与仪器设备
2.2 试验方法
2.2.1 免疫组织化学
2.2.2 牛卵巢颗粒细胞分离培养及鉴定
2.3 试验结果与分析
2.3.1 LRH-1 在牛卵巢组织中的定位
2.3.2 牛卵巢颗粒细胞鉴定
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 LRH-1 的小分子激活剂DLPC对牛卵巢颗粒细胞类固醇激素分泌的作用
3.1 试验材料
3.1.1 牛卵巢的采集
3.1.2 主要试剂与仪器
3.2 试验方法
3.2.1 牛卵巢的采集
3.2.2 小分子激活剂DLPC处理牛卵巢颗粒细胞
3.2.3 牛卵巢颗粒细胞总RNA提取及RT-qPCR
3.2.4 牛卵巢颗粒细胞蛋白的提取及Western-bolt检测方法
3.2.5 ELISA检测牛颗粒细胞类固醇的激素分泌
3.3 试验结果与分析
3.3.1 DLPC对牛颗粒细胞LRH-1 基因及蛋白表达的影响
3.3.2 激活剂DLPC对牛颗粒细胞类固醇激素分泌的影响
3.3.3 激活剂DLPC对牛卵巢颗粒细胞类固醇受体基因表达的影响
3.3.4 激活剂DLPC对牛卵巢颗粒细胞类固醇合成途径相关基因表达的影响
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 LRH-1 的激活剂DLPC对牛卵巢颗粒细胞增殖及凋亡的影响
4.1 试验材料与方法
4.1.1 主要仪器设备
4.1.2 主要试剂
4.1.3 牛卵巢的采集
4.1.4 小分子激活剂DLPC处理牛卵巢颗粒细胞
4.1.5 体外培养牛卵巢颗粒细胞
4.1.6 牛卵巢颗粒细胞蛋白的提取及Western-bolt检测方法
4.1.7 牛卵巢颗粒细胞增殖活力检测
4.1.8 Annexin V-FITC/PI检测牛卵巢颗粒细胞凋亡
4.1.9 统计学分析
4.2 试验结果与分析
4.2.1 LRH-1 对牛卵巢颗粒细胞PPARγ蛋白表达的影响
4.2.2 不同浓度的DLPC对牛卵巢颗粒细胞增殖的影响
4.2.3 LRH-1 对牛卵巢颗粒细胞凋亡的影响
4.3 讨论
4.4 小结
第五章 LRH-1 通过孕酮受体信号通路调节牛卵巢颗粒细胞凋亡
5.1 材料与方法
5.1.1 主要试剂与仪器设备
5.1.2 牛卵巢的采集与分离培养
5.1.3 DLPC和 P4 处理牛卵巢颗粒细胞
5.1.4 牛卵巢颗粒细胞增殖活力检测
5.1.5 免疫荧光检测牛卵巢颗粒细胞孕酮相关受体的表达
5.1.6 Annexin V-FITC/PI检测牛卵巢颗粒细胞凋亡
5.1.7 牛卵巢颗粒细胞总蛋白的提取与Western blot
5.1.8 统计学分析
5.2 试验结果与分析
5.2.1 LRH-1 对牛卵巢颗粒细胞PGR基因表达的影响
5.2.2 LRH-1 对牛卵巢颗粒细胞孕酮受体信号途径相关蛋白的影响
5.2.3 DLPC与P4对牛卵巢颗粒细胞增殖的作用
5.2.4 LRH-1 通过孕酮受体信号途径调节牛卵巢颗粒细胞凋亡
5.2.5 LRH-1与P4对牛卵巢颗粒细胞凋亡蛋白表达的作用
5.3 讨论
5.4 小结
结论
创新点
附录
参考文献
主要符号对照表
致谢
个人简介
本文编号：3867268
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 哺乳动物卵泡发育机制
1.1.1 卵子的发生与卵泡发育
1.1.2 卵泡的发育调控机制
1.1.3 卵泡的闭锁研究进展
1.2 LRH-1 与类固醇激素分泌
1.2.1 LRH-1 与类固醇激素的作用及机理
1.2.2 卵泡类固醇合成机制
1.3 孕酮受体信号通路对凋亡的影响
第二章 颗粒细胞培养鉴定及LRH-1 在卵巢组织中的表达定位
2.1 试验材料
2.1.1 牛卵巢的采集
2.1.2 主要试剂与仪器设备
2.2 试验方法
2.2.1 免疫组织化学
2.2.2 牛卵巢颗粒细胞分离培养及鉴定
2.3 试验结果与分析
2.3.1 LRH-1 在牛卵巢组织中的定位
2.3.2 牛卵巢颗粒细胞鉴定
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 LRH-1 的小分子激活剂DLPC对牛卵巢颗粒细胞类固醇激素分泌的作用
3.1 试验材料
3.1.1 牛卵巢的采集
3.1.2 主要试剂与仪器
3.2 试验方法
3.2.1 牛卵巢的采集
3.2.2 小分子激活剂DLPC处理牛卵巢颗粒细胞
3.2.3 牛卵巢颗粒细胞总RNA提取及RT-qPCR
3.2.4 牛卵巢颗粒细胞蛋白的提取及Western-bolt检测方法
3.2.5 ELISA检测牛颗粒细胞类固醇的激素分泌
3.3 试验结果与分析
3.3.1 DLPC对牛颗粒细胞LRH-1 基因及蛋白表达的影响
3.3.2 激活剂DLPC对牛颗粒细胞类固醇激素分泌的影响
3.3.3 激活剂DLPC对牛卵巢颗粒细胞类固醇受体基因表达的影响
3.3.4 激活剂DLPC对牛卵巢颗粒细胞类固醇合成途径相关基因表达的影响
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 LRH-1 的激活剂DLPC对牛卵巢颗粒细胞增殖及凋亡的影响
4.1 试验材料与方法
4.1.1 主要仪器设备
4.1.2 主要试剂
4.1.3 牛卵巢的采集
4.1.4 小分子激活剂DLPC处理牛卵巢颗粒细胞
4.1.5 体外培养牛卵巢颗粒细胞
4.1.6 牛卵巢颗粒细胞蛋白的提取及Western-bolt检测方法
4.1.7 牛卵巢颗粒细胞增殖活力检测
4.1.8 Annexin V-FITC/PI检测牛卵巢颗粒细胞凋亡
4.1.9 统计学分析
4.2 试验结果与分析
4.2.1 LRH-1 对牛卵巢颗粒细胞PPARγ蛋白表达的影响
4.2.2 不同浓度的DLPC对牛卵巢颗粒细胞增殖的影响
4.2.3 LRH-1 对牛卵巢颗粒细胞凋亡的影响
4.3 讨论
4.4 小结
第五章 LRH-1 通过孕酮受体信号通路调节牛卵巢颗粒细胞凋亡
5.1 材料与方法
5.1.1 主要试剂与仪器设备
5.1.2 牛卵巢的采集与分离培养
5.1.3 DLPC和 P4 处理牛卵巢颗粒细胞
5.1.4 牛卵巢颗粒细胞增殖活力检测
5.1.5 免疫荧光检测牛卵巢颗粒细胞孕酮相关受体的表达
5.1.6 Annexin V-FITC/PI检测牛卵巢颗粒细胞凋亡
5.1.7 牛卵巢颗粒细胞总蛋白的提取与Western blot
5.1.8 统计学分析
5.2 试验结果与分析
5.2.1 LRH-1 对牛卵巢颗粒细胞PGR基因表达的影响
5.2.2 LRH-1 对牛卵巢颗粒细胞孕酮受体信号途径相关蛋白的影响
5.2.3 DLPC与P4对牛卵巢颗粒细胞增殖的作用
5.2.4 LRH-1 通过孕酮受体信号途径调节牛卵巢颗粒细胞凋亡
5.2.5 LRH-1与P4对牛卵巢颗粒细胞凋亡蛋白表达的作用
5.3 讨论
5.4 小结
结论
创新点
附录
参考文献
主要符号对照表
致谢
个人简介
本文编号：3867268
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