人趋化因子受体CCR3与β-arrestin相互作用研究

发布时间：2024-03-04 21:27

　　G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)主要负责介导细胞内外跨膜信号转导功能,是重要的药物靶点.β-arrestin作为GPCRs行使功能的重要途径之一,其对调节GPCRs信号转导过程有重要意义.但目前对于β-arrestin如何与GPCRs相互作用并调控其信号转导功能尚不十分清楚.本文以趋化因子受体3 (CC chemokine receptor 3,CCR3)为研究对象,构建了β-arrestin与CCR3的共表达体系,利用激光共聚焦荧光成像与荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术研究了β-arrestin与CCR3在活细胞水平的相互作用,利用RNAi和趋化实验考察了β-arrestin对CCR3稳转细胞趋化行为的调控作用,并在体外利用石英晶体微天平(quartz crystal microbalance,QCM)技术测定了β-arrestin突变体(R169E)与CCR3之间结合常数.结果显示,趋化因子CCL11 (chemokine C-C motif ligan...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 重组质粒的构建及β-arrestin si RNA的合成
        1.2.2 β-arrestin蛋白与CCR3的免疫荧光成像
        1.2.3 荧光共振能量转移检测（FRET)
        1.2.4 β-arrestin定位分析
        1.2.5 β-arrestinsi RNA干扰效率及其对CCR3蛋白表达的影响
        1.2.6 β-arrestin沉默对CCR3受体趋化作用的影响
        1.2.7 β-arrestin与CCR3的体外结合试验
2 结果
    2.1 β-arrestin与CCR3共表达免疫荧光成像
    2.2 β-arrestin转位实验
    2.3 荧光共振能量转移技术检测β-arrestin与CCR3相互作用
    2.4 si RNA干扰对CCR3蛋白表达量的影响
    2.5 CCR3稳转细胞趋化实验
    2.6 β-arrestin与CCR3体外相互作用表征
3 讨论



本文编号：3919199