草鱼CHOP基因的克

发布时间：2024-03-17 14:11

　　CHOP(又称DNA损伤诱导基因153(GADDl53)),作为生物体内普遍存在的一种转录调控因子,是C/EBP家族成员之一,在内质网应激介导的细胞凋亡中扮演着重要的作用。在本文中我们首先用同源基因克隆的方法克隆与鉴定了草鱼CHOP基因的全长cDNA序列(KX013389)及其启动子序列。CiCHOP cDNA全长1520bp,包括1个246bp的5′非翻译区、1个编码248个氨基酸的747bp的开放阅读框和1个527bp的3′非翻译区。CHOP蛋白在各物种中高度保守,其核心结构域均为“碱性亮氨酸拉链结构域(BRLZ)”。系统进化树分析显示,草鱼CHOP与其他鱼类分布在同一分支上具有较高的相似性,特别是与斑马鱼的进化关系显示最为接近。ATF4是细胞内质网应激中的关键调控因子。RT-PCR结果显示:不同浓度的衣霉素刺激均能诱导CiCHOP和CiATF4的表达上调。而随着刺激时间的增加,他们的表达量也出现明显上升并且表现出一致性,提示我们这两者之间可能存在一定的相互作用关系。为了进一步研究CHOP在外界刺激后的转录调控机制,我们克隆了CiCHOP的启动子序列并且原核表达和纯化了CiATF6...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图3.3CHOP的系统进化树

图3.3CHOP的系统进化树Fig3.3PhylogenetictreeofCHOPproteinsequencesClustalX软件对比24个物种中的蛋白序列，其中包括：山羊(NP_001274160.1),野猪(NP_001138317.1),家鼠(N....

图3.4不同浓度衣霉素刺激后草鱼细胞内CHOP、ATF4的表达分析

31图3.4不同浓度衣霉素刺激后草鱼细胞内CHOP、ATF4的表达分析Fig3.4QuantitativeExpressionAnalysisofCiCHOP、CiATF4草鱼CIK细胞经不同浓度衣霉素刺激后CHOP、ATF4基因的表达情况。以0μg....

图3.5相同浓度衣霉素刺激不同时间后草鱼细胞内CHOP、ATF4的表达分析

32图3.5相同浓度衣霉素刺激不同时间后草鱼细胞内CHOP、ATF4的表达分析Fig3.5QuantitativeExpressionAnalysisofCiCHOP、CiATF4草鱼CIK细胞经相同浓度衣霉素刺激不同时间后CHOP、ATF4基因的表达情....

图3.6草鱼ATF4、ATF6与草鱼CHOP启动子的亲和性分析

图3.6草鱼ATF4、ATF6与草鱼CHOP启动子的亲和性分析Fig3.6AffinityanalysisofCiATF4andCiATF6WithCiCHOPpromoters（A）凝胶阻滞分析草鱼ATF4与草鱼CHOP启动子（CiCHO....

本文编号：3931147