重组泛素样特异性蛋白酶1在大肠杆菌中的表达条件优化与分离纯化

发布时间：2024-03-17 07:03

　　目的确定重组泛素样特异性蛋白酶1 (ubiquitin-like specific protease 1,Ulp1)在大肠杆菌中的最佳表达条件并进行分离纯化。方法采用DNA重组技术,构建重组质粒Ulp1-p ET-28a,并转化到Escherichia coli BL21 (DE3)细胞中,以IPTG诱导Ulp1原核表达,并从诱导时间、诱导温度和IPTG诱导浓度方面确定其最佳表达条件,再以亲和层析法分离纯化Ulp1。结果 SDS-PAGE分析表明,工程菌诱导温度为30℃、诱导时间为6 h、IPTG浓度为0.2 mmol/L时Ulp1表达量最高,表达量约为350 mg/L且成功进行了Ulp1的分离纯化。结论本研究成功进行了Ulp1原核表达条件的优化与分离纯化,为Ulp1在生物工程中的酶切应用奠定了实验基础。

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和质粒
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 仪器与设备
    1.2 方法
        1.2.1 Ulp1原核表达质粒的构建与鉴定
        1.2.2 Ulp1的原核表达
        1.2.3 Ulp1诱导时间的优化
        1.2.4 Ulp1诱导温度的优化
        1.2.5 IPTG诱导浓度的优化
        1.2.6 饱和硫酸铵沉淀制备粗提液
        1.2.7 Ulp1分离纯化与鉴定
2 结果与分析
    2.1 Ulp1原核表达质粒的构建
    2.2 Ulp1的原核表达
    2.3 确定Ulp1最佳诱导时间
    2.4 确定Ulp1最佳诱导温度
    2.5 确定IPTG最佳诱导浓度
    2.6 Ulp1分离纯化与鉴定
3 讨论



本文编号：3930685