MORC2在诱导肌细胞C2C12分化中的作用及其机制研究

发布时间：2024-04-06 16:38

　　目的:MORC2是Microrchidia家族CW型锌指蛋白(MORC)家族成员之一。MORC家族在进化上高度保守,并因其在抑制转录、表观遗传调控和DNA损伤修复等方面的重要功能引起人们的广泛关注。MORC2蛋白是一种普遍表达的蛋白,结构上主要包含ATPase域,CW锌指型结构域,核定位信号和卷曲螺旋结构域四个部分,分子量约为117kD。它在染色质重塑、DNA损伤修复和脂肪生成以及肿瘤的发生发展中发挥着重要作用。MORC2主要定位于细胞核,但在细胞质中也有少量分布,有研究表明MORC2在细胞质的定位是脂质代谢和体内平衡的关键参与者,能够调节细胞质中脂肪细胞分化和脂肪生成。而研究表明蛋白的核质分布的改变往往伴随着结构和生物学功能的转变。C2C12细胞是由C3H小鼠骨骼肌卫星细胞永生化而来的细胞株,属于小鼠的骨骼肌干细胞。该细胞具有与骨骼肌前祖细胞相同的生物学行为,且其细胞特性和形态均一,可无限传代培养。C2C12细胞在2%马血清培养条件下具有单向分化为肌细胞的能力,同时能够表达MyoD、myogenin、myosin等成熟骨骼肌的多种标志蛋白。因而在肌细胞发育分化研究中,常常把它视为实验...

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞来源
        2.1.2 主要试剂及药品
        2.1.3 主要仪器设备
        2.1.4 主要试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 质粒构建
        2.2.2 包装慢病毒
        2.2.3 C2C12细胞感染、稳定株筛选及鉴定
        2.2.4 C2C12细胞诱导分化
        2.2.5 RNA水平的检测
        2.2.6 蛋白水平检测
        2.2.7 细胞形态学分析
        2.2.8 细胞免疫荧光
        2.2.9 流式周期法检测细胞周期
        2.2.10 统计学方法
3 结果
    3.1 重组质粒 Ubi-MCS-Flag-cherry-MORC2 的鉴定
    3.2 构建 C2C12 细胞稳转过表达 MORC2 细胞系
    3.3 过表达MORC2对C2C12 细胞分化和增殖能力的影响
    3.4 MORC2对肌分化标志物表达的影响
    3.5 MORC2 对分化抑制因子Id3 表达的影响
    3.6 在诱导分化过程中MORC2发生了细胞定位的改变
    3.7 在诱导分化过程中Id3和Myo D的细胞分布
    3.8 细胞核浆分离检测MORC2、I对以及Myo D表达变化
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢



本文编号：3946888