多种物理方法分离脂肪源基质血管组分细胞的比较

发布时间：2024-04-06 18:44

　　背景:脂肪源基质血管组分和脂肪源性干细胞在组织工程中的应用受到越来越多科研工作者的关注。当前,分离脂肪源基质血管组分的方法主要有酶解法和推注法,但这两种方法都存在着不容忽视的缺点。目的:寻找一种更加高活性、安全、简便的制备脂肪源基质血管组分的方法。方法:以无任何处理的脂肪组织为阴性对照,酶解法为阳性对照,通过细胞量、存活率、细胞碎片、细胞活性、增殖率等指标来比较酶解法、普通推注法、改良推注法、玻璃珠破碎法(简称玻璃珠法)及内置式超声波破碎法(简称内置超声波法)的差异。酶解法及普通推注法为目前分离脂肪源基质血管组分细胞普遍使用的方法;改良推注法是在普通推注法的基础上进行改良后得到的方法;玻璃珠法是利用玻璃珠震荡产生的剪切力,在脂肪颗粒中加入玻璃珠后在2 500 r/min的条件下震荡9 min以制备基质血管组分细胞;内置超声波法则是利用空化效应,在25 W的功率下对脂肪组织处理36 s以获得基质血管组分细胞。结果与结论:①5种方法获得的基质血管组分细胞的大小差异无显著性意义(P> 0.05);②阴性对照组细胞活性最低,酶解法细胞活性最高,酶解法、玻璃珠法及内置超声波法的细胞活性高于...

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【部分图文】：

图2人基质血管组分细胞形态(×40)

将用完全培养液重悬的含有基质血管组分细胞的细胞悬液进行涂布，在倒置显微镜下进行观察，见图2。将酶解法、改良推注法、玻璃珠法及内置超声波法收集到的基质血管组分细胞的大小进行比较，总的细胞大小均值为5.19μm，酶解法细胞大小为(5.22±0.26)μm，改良推注法细胞大小为(5.1....

图3各组基质血管组分细胞存活率

见图3。玻璃珠法细胞存活率为(75.26±1.94)%，内置超声波法细胞存活率为(76.25±0.98)%，而普通推注法和改良推注法细胞存活率分别为(58.34±1.15)%、(64.33±2.44)%，略低于玻璃珠法。酶解法细胞存活率均值最高且与阴性对照相差不大，为(94.24....

图4流式细胞仪检测细胞碎片率和活细胞率

采用流式细胞仪进行检测，见图4，由结果可以看到酶解法、玻璃珠法、内置超声波法、改良推注法、普通推注法收集到的基质血管组分细胞中碎片比例分别为(2.35±1.48)%,(7.85±4.43)%,(10.63±4.37)%,(24.49±4.65)%,(35.51±4.23)%，酶解....

图5各组基质血管组分细胞碎片率

图4流式细胞仪检测细胞碎片率和活细胞率酶解法的细胞凋亡率极低，为(0.019±0.011)%，普通推注法的细胞凋亡率较高，为(6.87±2.56)%，改良推注法、玻璃珠法、内置超声波法的细胞凋亡率分别为(4.79±2.35)%,(0.051±0.032)%,(0.092±0.0....

本文编号：3947034