利用CRISPR/Cas9基因编辑技术定点编辑水稻赤霉素2氧化酶基因OsGA2ox10

发布时间：2024-05-19 20:44

　　通过CRISPR/Cas9基因编辑技术,以粳稻品种‘沈农265’为遗传背景对水稻赤霉素2氧化酶基因OsGA2ox10进行编辑,获得了该基因编码序列翻译提前终止纯合突变体ga2ox10-1、ga2ox10-2和ga2ox10-3。经RT-PCR检测突变体中OsGA2ox10基因表达量相比野生型极显著降低。表达模式分析显示该基因在根、茎、叶、叶鞘、幼穗中均有表达,其中在幼穗中表达量最高。亚细胞定位结果显示OsGA2ox10与GFP融合蛋白定位于细胞质中。本实验的开展为进一步明确GA2ox10基因功能和该基因在赤霉素代谢失活调控网络中的作用提供了依据。

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【文章目录】：
1 结果与分析
    1.1 生物信息学分析
        1.1.1 OsGA2ox10基因序列分析
        1.1.2 OsGA2ox家族进化树构建
    1.2 转基因阳性苗检测及突变方式分析
    1.3 基因组织表达分析
    1.4 OsGA2ox10亚细胞定位结果分析
2 讨论
3 材料与方法
    3.1 供试材料
    3.2 实验涉及的载体及菌株
    3.3 生物信息学分析及进化树的构建
    3.4 基因编辑特异性靶点的选择
    3.5 CRISPR/Cas9基因编辑载体的构建
    3.6 转基因阳性苗检测及突变方式分析
    3.7 基因组织表达分析
    3.8 OsGA2ox10亚细胞定位瞬时表达载体的构建
    3.9‘沈农265’原生质体的提取及转化



本文编号：3978438