VANGL2在人hUVEC细胞中初级纤毛装配和解聚的作用

发布时间：2024-06-02 05:15

　　动脉粥样硬化是心血管疾病的主要发病原因。大量研究显示,动脉粥样硬化的形成与内皮细胞的初级纤毛相关。探讨内皮细胞中的初级纤毛装配和解聚的机制,对于揭示动脉粥样硬化的发病机制具有重要的理论和实践意义。目前,作为平面细胞极化(PCP)信号通路的特有组分VANGL平面细胞极性蛋白2(VANGL2)在内皮细胞中与初级纤毛相关的研究甚少。因此,本研究构建VANGL2的慢病毒稳定干扰和过表达人脐静脉内皮细胞(hUVEC)系。从形态学上对初级纤毛分布的情况进行标记,同时用免疫荧光对VANGL2可能相互作用的蛋白质进行共定位检测,并利用免疫印迹进一步对其下游蛋白质蓬乱蛋白(DVL2)、初级纤毛装配相关蛋白质巴特-比德尔综合征8(BBS8)和纤毛内转运系统88(IFT88)、初级纤毛解聚相关蛋白质运动蛋白家族成员2A(KIF2A)和143位点处丝氨酸磷酸化的蓬乱蛋白(pDVL2)进行检测,用免疫共沉淀检测与VANGL2、下游蛋白质DVL2相互作用的蛋白质。结果表明,免疫荧光标记初级纤毛的荧光图显示,过表达VANGL2后初级纤毛数量显著增多(P<0.05),其长度也较其他组更长,其定位方向更倾向于VA...

【文章页数】：12 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 Vangl2过表达和沉默慢病毒颗粒合成
        1.2.1 目的基因人Vangl2编码序列的扩增
        1.2.2 干扰靶点设计和引物合成
        1.2.3 过表达和干扰表达载体的构建
        1.2.4 重组慢病毒质粒的包装与转染
        1.2.5 病毒滴度测定
    1.3 构建稳定过表达和干扰VANGL2的稳定hUVECs细胞系
        1.3.1 慢病毒感染hUVECs细胞
        1.3.2 Real-time qPCR检测沉默和过表达Vangl2的mRNA表达水平
        1.3.3 Western印迹检测沉默和过表达VANGL2的效率
    1.4 免疫荧光检测初级纤毛在各组细胞系中的分布
    1.5 免疫荧光检测各组细胞系中VANGL2可能相互作用的蛋白质共定位
    1.6 过表达和干扰VANGL2的稳定hUVECs细胞系中的VANGL2下游蛋白质及纤毛相关蛋白质的表达及相互作用关系
        1.6.1 Western印迹检测过表达和干扰VANGL2的稳定hUVECs细胞系中的VANGL2下游蛋白质及纤毛相关蛋白质的表达
        1.6.2 免疫共沉淀检测与VANGL2、下游蛋白质DVL2相互作用的蛋白质
    1.7 数据统计方法
2 结果
    2.1 成功构建重组过表达pHBLV-Vangl2和重组干扰pHB-shRNA-Vangl2慢病毒载体
    2.2 重组过表达pHBLV-Vangl2和重组干扰pHB-shRNA-Vangl2慢病毒载体的包装、转染和滴度测定
    2.3 成功构建过表达和干扰VANGL2的稳定hUVECs细胞系
    2.4 VANGL2能够促进人内皮细胞中初级纤毛的发生和伸长过程
    2.5 VANGL2与BBS8、IFT88、PLK1之间可能存在相互作用以调节初级纤毛相关过程
    2.6 VANGL2通过上调DVL2促进纤毛的解聚过程,同时通过下调pDVL2、上调BBS8和IFT88增加纤毛的装配过程
3 讨论



本文编号：3986908