斑马鱼Ngly1的生物学特性及克隆表达研究

发布时间：2024-11-06 21:27

　　 为研究斑马鱼ngly1基因的功能,我们利用序列比对、同源建模和系统发育分析,发现斑马鱼Ngly1蛋白与其哺乳动物同源物在进化上高度保守,并且其三级结构与小鼠Ngly1十分相似。通过基因克隆获得了斑马鱼ngly1基因的全长cDNA,转染HEK293T细胞后观察到分子量约98kD的GFP-Ngly1融合蛋白。通过荧光定量PCR技术对斑马鱼胚胎发育和不同组织中ngly1的表达量进行分析,结果显示斑马鱼ngly1 mRNA在胚胎发育的全过程中都可以检测到,包括二细胞期,24 h,48 h和72 h,并且在胚胎发育第5天时达到高峰。在成鱼中,相比于其他组织,ngly1在卵巢和睾丸中高表达,在肝脏中低表达。

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

图2ngly1核酸序列的系统进化树分析,

为了研究ngly1的组织分布,从健康斑马鱼的不同组织中提取总RNA,例如心脏、腮、肝脏、脾脏、肾脏、鳔、眼、脑、卵巢、睾丸、肌肉和肠等,并且通过qRT-PCR测定ngly1的转录水平,先前的研究提示我们应谨慎选择内参基因[24]。为了找到适合斑马鱼组织分布的内参基因,通过qRT-....

本研究通过生物信息学分析鉴定了斑马鱼ngly1基因与哺乳动物的亲缘关系,克隆了斑马鱼ngly1基因,并且确定了其时空表达模式。通过同源建模及结构预测可知,Ngly1蛋白的654个氨基酸包含三个结构域:PUG(aa20-81),TGc(aa286-341)和PAW(aa477....

图3重组Ngly1的表达图5胚胎发育过程中ngly1基因的时空表达

本文编号：4011608