生物钟核心元件CHRONO纯化及与GR互作的初步研究

发布时间：2024-11-30 22:03

　　CHRONO是核心生物钟元件,对于CHRONO结构和功能的研究是本课题研究的主要目的。本篇论文主要围绕CHRONO的纯化及与GR相互作用的功能展开,CHRONO作为生物钟新发现的核心元件,既在生物钟的核心振荡网络中占有重要部分,又与核心生物钟元件CRY有类似的功能,但是CHRONO功能还没有被清楚阐明。鉴于蛋白结构可以促进了解相应的功能,通过阅读文献及实验室前期工作,开始对CHRONO结构的初步研究。实验主要是通过构建载体导入大肠杆菌中表达蛋白,并对目的蛋白的生理特性进行表征测定,为后期结构的研究奠定基础。首先对CHRONO蛋白,CHRONO的N端和C端的融合片段(CHRNC蛋白),CHRONO的helix区域(CHRH蛋白)进行探索,了解CHRONO蛋白的生理特性及存在状态。实验同时选择V29H和V28H骨架载体构建了CHRHC(111-298)片段(CHR与BMAL1相互作用的区域)的系列延长截短体,构建成功后进行表达与纯化。通过镍柱纯化得到14个V28H-CHRHC目的蛋白,蛋白量可观且纯度较好。将纯化的蛋白经分子筛纯化,并通过蛋白标定实验测定蛋白聚体状态,结果表明V28H-CHR...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.1昼夜节律系统的组织

安徽大学硕士学位论文1第一章背景介绍1.1生物钟1.1.1生物钟背景生物钟（biologicalclock）是生物体在长期进化过程中形成的一种能与自然环境相适应接近24h周期变化的一种生理机制。生物钟参与生命体的多种生理活动，例如夜行动物的觅食，丝状真菌开始产生孢子，蓝藻经过光合....

图1.2哺乳动物昼夜节律模型

第一章背景介绍21.1.2生物钟的分子机制生物钟的分子机制是一个复杂的反馈回路（图1.2），主要包括Clock，Bmal1，Per1，Per2，Cry1，Cry2，Csnk1e，Csnk1d，Rev-erbα，Rorγ，Fbxl3等基因和它们转录翻译的产物，这个分子机制的中心由B....

图1.3GM129在调节BMAL1-CLOCK活性中的作用的模型

褂蜃?家蜃覦bp、Hlf和Tef[55]。此外，研究还发现了一个基因Gm129，它编码一种未曾被报道的蛋白质，在哺乳动物中非常保守，由375个氨基酸组成，分子量约为45kDa。GM129与核心时钟蛋白BMAL1和PER2有相互作用，定位于细胞核，GM129蛋白与BMAL1-CLO....

图3.1CHR蛋白一级结构

第三章CHRHONO及CHRH蛋白的纯化和状态分析18第三章CHRONO及CHRH蛋白的纯化和状态分析3.1引言前期研究表明CHRONO蛋白无同源性结构，其结构与功能部分尚不明确，了解CHRONO蛋白特征对研究其二级和三级结构是必要的。首先设计实验进行CHRONO蛋白的纯化及生理....

本文编号：4013079