来源于M.natoriense TNJL143-2菌的D-氨基酰化酶的固定化研究

发布时间：2025-03-30 02:40

　　固定化酶是用物理或化学手段,使之成为不溶于水的,具有酶活性,可在一定的空间范围内起催化作用,并能反复和连续使用的酶。目前在酶的应用领域,固定化技术已经成为一个重要的研究项目。与游离酶相比,固定化酶具有高稳定性、回收方便、反应可控、成本低、可循环利用等优点。在临床诊断、化学分析、环境保护和能源开发等领域,固定化酶均表现出不可替代的作用。D-氨基酸作为重要的中间体,常用于合成抗生素、活性肽、农药、食品添加剂等。目前D-氨基酸的生产主要采用化学法,但是具有反应条件非常剧烈、污染较大和费用高等多个缺点,而生物法生产D-氨基酸具有反应条件温和,污染小等优点。其中利用D-氨基酰化酶特异性水解N-酰基-D-氨基酸制备D-氨基酸的方法理论生产率为100%,具有较大的应用潜力。本研究针对来源于M.natoriense TNJL143-2的D-氨基酰化酶,首次尝试利用琼脂糖、介孔二氧化硅MCM-41、SBA-15三种载体,通过包埋法以及吸附法对其进行固定化,并分别对所制备的各固定化酶的适用范围、稳定性、重复利用性以及固定化效果等数据进行检测分析,以对比各固定化酶间的性能差异。结果显示制备的三种固定化酶均表现...

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 前序
        1.1.1 D-氨基酸的概念
        1.1.2 D-氨基酸的分布
        1.1.3 D-氨基酸的用途
        1.1.4 D-氨基酸的生产途径
    1.2 研究背景
        1.2.1 D-氨基酰化酶
        1.2.2 固定化酶的研究进展与现状
    1.3 研究材料
        1.3.1 来源于Microbacterium natoriense的 D-氨基酰化酶
        1.3.2 本研究中固定化酶载体的选择
    1.4 研究内容
    1.5 研究目的及意义
第二章 酶的固定化
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验仪器
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 培养基及溶液
        2.1.4 实验菌株
    2.2 实验方法
        2.2.1 Microbacterium natoriense TNJL143-2 菌株的恢复培养及保存
        2.2.2 粗酶液的制备
        2.2.3 薄层层析法(TLC)鉴定粗酶液D-氨基酰化酶活性
        2.2.4 酶的固定化方法
        2.2.5 薄层层析法(TLC)鉴定固定化酶活性
        2.2.6 考马斯亮蓝法检测蛋白质的固定量
    2.3 实验结果
        2.3.1 D-氨基酰化酶活性鉴定结果
        2.3.2 固定化酶活性鉴定结果
        2.3.3 固定化酶的蛋白固定率
    2.4 本章小结
第三章 固定化酶的酶学性质研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验仪器
        3.1.2 实验试剂
        3.1.3 溶液
    3.2 实验方法
        3.2.1 D-氨基酸的定量检测—DAO法
        3.2.2 固定化酶米氏常数(Km)的测定
        3.2.3 不同酶促反应条件对固定化酶活性的影响
        3.2.4 保存稳定性
        3.2.5 抗生素及广谱型酶稳定剂对固定化酶保存稳定性的影响
        3.2.6 重复利用性
    3.3 实验结果
        3.3.1 固定化酶米氏常数(Km)测定
        3.3.2 最适pH
        3.3.3 最适温度
        3.3.4 酸碱稳定性
        3.3.5 热稳定性
        3.3.6 保存稳定性
        3.3.7 抗生素及广谱型酶稳定剂对固定化酶保存稳定性的影响
        3.3.8 重复利用性
    3.4 本章小结
第四章 固定化酶蛋白固定效果的研究
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验仪器
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 溶液
    4.2 实验方法
        4.2.1 不同pH反应条件对蛋白固定化效果的影响
        4.2.2 不同pH保存条件对蛋白固定化效果的影响
        4.2.3 不同温度反应条件对蛋白固定化效果的影响
        4.2.4 不同温度保存条件对蛋白固定化效果的影响
        4.2.5 保存时间对蛋白固定化效果的影响
        4.2.6 反应次数对蛋白固定化效果的影响
    4.3 实验结果
        4.3.1 不同pH反应条件对蛋白固定化效果的影响
        4.3.2 不同pH保存条件对蛋白固定化效果的影响
        4.3.3 不同温度反应条件对蛋白固定化效果的影响
        4.3.4 不同温度保存条件对蛋白固定化效果的影响
        4.3.5 保存时间对蛋白固定化效果的影响
        4.3.6 反应次数对蛋白固定化效果的影响
    4.4 本章小结
第五章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
攻读硕士学位期间取得的成果
致谢



本文编号：4038057