牛乳铁蛋白活性多肽LfcinB在大肠杆菌中的串联表达、纯化及生物活性分析

发布时间：2025-04-01 00:34

　　 牛乳铁蛋白（LfcinB）是一种阳离子抗菌肽,具有抗细菌、抗肿瘤等多种生物学活性.本文探讨了利用SUMO（Small Ubiquitin-Related Modifier）融合标签在大肠杆菌系统中通过LfcinB串联表达策略制备重组LfcinB的方法.结果显示,大于90%的SUMO-（LfcinB）_n蛋白以可溶形式表达于BL21（DE3）细胞中;SUMO-（LfcinB）₂的表达量高于SUMO-LfcinB和SUMO-（LfcinB）₃.通过SUMO特异性蛋白酶切除SUMO标签,羟胺释放单体,得到纯化的重组LfcinB,产率约为15 mg/L.生物活性结果表明,重组LfcinB具有一定的抗菌和抗肿瘤活性.本研究为结合SUMO标签与串联表达策略大量制备获得具有生物学功能的重组抗菌肽提供了一种有效的方法.

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

图2 重组表达菌生长曲线及重组蛋白表达分析

为提高抗菌肽的表达产量,通常采用串联多聚体形式来代替单体形式进行抗菌肽的融合表达[9,13].pSUMO是本实验室前期构建的一个带有SUMO标签的原核表达质粒,具有BamHⅠ、XbaⅠ、BglⅡ等多克隆酶切位点.将扩增得到的LfcinB基因片段和pSUMO经BamHⅠ和Hin....

图1 pSUMO-(LfcinB)n表达质粒的构建

图2重组表达菌生长曲线及重组蛋白表达分析2.2SUMO-(LfcinB)n重组蛋白的表达

图3 SUMO-(LfcinB)n蛋白纯化与鉴定的SDS-PAGE分析

由于抗菌肽自身的抗菌性,通常采用融合表达策略以降低潜在的宿主细胞毒性.然而,并非所有的融合标签都能有效避免宿主细胞毒性,例如GST标签并不能有效避免宿主细胞毒性[15].本研究发现SUMO标签融合能在一定程度上避免(LfcinB)n宿主细胞毒性,并且影响的程度与串联拷贝数有关....

图5 重组LfcinB对金黄色葡萄球菌的抗菌检测

经亲和层析纯化得到的SUMO-(LfcinB)n融合蛋白用SUMO酶在30℃酶切30min,以释放抗菌肽(LfcinB)n.Tricine-SDS-PAGE测定SUMO酶的酶切作用,结果如图4所示.可见SUMO酶能高效切割SUMO-(LfcinB)n融合蛋白,释放(Lf....

本文编号：4038665