拟南芥根毛功能基因AtGDPD-Like3关键氨基酸位点鉴定

发布时间：2025-04-15 01:55

　　 At GDPD-Like3是编码甘油磷酸二酯磷酸二酯酶（GDPD）类似基因,拟南芥该家族基因At GDPD-Like3突变体shv3存在严重的根毛发育缺陷。为了鉴定At GDPD-Like3关键氨基酸位点,我们构建S⁵³⁸A、V⁵⁵⁶A和D⁶²⁸A单点突变At GDPD-Like3,分别转化atgdpdl3突变体并观察其恢复根毛缺陷程度。结果显示V⁵⁵⁶A、D⁶²⁸A位点突变At GDPD-Like3完全恢复atgdpdl3根毛生长缺陷表型,但S⁵³⁸A突变At GDPD-Like3只是部分恢复根毛缺陷。这些结果表明Ser538是At GDPD-Like3较为关键的氨基酸位点,突变影响其蛋白质功能行使,同时暗示At GDPD-Like3还存在其它的关键氨基酸位点。此研究结果为进一步探究At GDPD-Like3蛋白功能行使的作用机制奠定了基础。

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【部分图文】：

图1 At GDPD-Like3及其同源蛋白氨基酸序列比对

AtGDPD-Like3编码759个氨基酸，含有GDPD-Like结构域。选用大豆，毛果杨，油菜，甘蓝，高粱，玉米等22个物种的AtGDPD-Like3同源基因，推测氨基酸序列一致性比对显示Leu521、Ser538、Leu544、Val556、Glu621、Asp628是保....

图4 At GDPD-Like3的Ser538、Val556、Asp628位点对根毛表型的作用

用浸花法对atgdpdl3突变体植株进行转化后，获得转FLAG-AtGDPDL3-S538A、-V556A和-D628A、FLAG-AtGDPDL3抗性植株4、4、3和4株系。以转基因植株cDNA为模板，用引物AtGDPDL3-RT-up/down进行半定量RT-PCR分析，结....

图2 At GDPD-Like3单点S538A、V556A和D628A突变的载体构建

图1AtGDPD-Like3及其同源蛋白氨基酸序列比对图3FLAG-AtGDPDL3-S538A、-V556A、-D628A和FLAG-AtGDPDL3转基因分子鉴定

图3 FLAG-AtGDPDL3-S538A、-V556A、-D628A和FLAG-AtGDPDL3转基因分子鉴定

图2AtGDPD-Like3单点S538A、V556A和D628A突变的载体构建2.2S538A、V556A和D628A单位点突变的构建

本文编号：4039890