外源CRE顺式元件对慢性吗啡作用SK-N-SH细胞CREB蛋白表达及DNA结合活性的影响
本文选题：吗啡 + SKNSH细胞株 ； 参考：《第四军医大学学报》2005年06期
【摘要】：目的: 研究以cAMP反应元件结合蛋白 (cAMPresponseelementbindingprotein,CREB)为靶点的CREB转录因子诱骗 (CRE transcriptionfactordecoyoligodeoxynucleotide、CRE decoyODN)对慢性吗啡作用SK N SH细胞CREB相关指标的影响.方法: 体外合成含cAMP反应元件 (cAMPresponseelement,CRE)的单链寡核苷酸,以DOTAP为转移介质,将CRE decoyODN与慢性吗啡作用和纳络酮催促戒断的SK N SH细胞共同孵育,采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影检测CRE decoyODN细胞掺入;EMSA检测CRE decoyODN与转录因子CREB结合的特异性以及其对慢性吗啡作用SK N SH细胞CREB的DNA结合活性影响;WesternBlot检测CREB 1及磷酸化CREB 1蛋白表达.结果: 以DOT AP为介质,将CRE decoyODN成功导入SK N SH细胞;慢性吗啡作用及纳络酮催促戒断使SK N SH细胞CREB的DNA结合活性和磷酸化CREB 1 蛋白表达明显增高 (P值均0 01),CREB 1蛋白无明显改变,CRE decoyODN可抑制CREB的DNA结合活性和磷酸化CREB 1蛋白表达的改变(P0 01),对CREB 1蛋白表达无明显影响.结论: CRE de coyODN可特异抑制慢性吗啡作用及纳络酮催促戒断SK N SH细胞CREB的DNA结合活性和磷酸化CREB 1蛋白表达的增高,对CREB 1蛋白表达无明显影响.
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of CREB transcription factor decoy (CRE transcriptiontordecoygodeoxynucleotidedeoxynucleotidec ODN) targeting camp response element binding protein (cAMP) response element binding protein (CREB) on CREB related indexes of SK N SH cells induced by chronic morphine. Methods: single strand oligonucleotides containing camp response element were synthesized in vitro. CRE decoy ODN was incubated with SK N SH cells induced by chronic morphine and naloxone induced withdrawal with DOTAP as transfer medium. The specificity of CRE decoy ODN binding to transcription factor CREB and the effect of CRE decoy ODN on the DNA binding activity of CREB in SK N SH cells induced by chronic morphine were detected by non-denatured polyacrylamide gel electrophoresis and autoradiography. The expression of CREB 1 and phosphorylated CREB 1 protein were detected. Results: CRE decoy ODN was successfully transfected into SK N SH cells in DOT AP medium. Chronic morphine and naloxone-precipitated withdrawal significantly increased CREB DNA-binding activity and phosphorylated CREB1 protein expression in SK N SH cells. No significant changes in CREB1 protein were observed in SK N SH cells. No change in CRE decoy ODN could inhibit CREB DNA binding activity and phosphoric acid expression in SK N SH cells. The change of CREB 1 protein expression was not significantly affected by P0 01 protein expression. Conclusion: CRE de coyODN can specifically inhibit the effect of chronic morphine and the increase of CREB DNA binding activity and phosphorylated CREB 1 protein expression in SK N SH cells induced by naloxone, but has no significant effect on CREB 1 protein expression.
【作者单位】： 河北医科大学法医学教研室 河北医科大学法医学教研室 河北医科大学法医学教研室 河北医科大学法医学教研室 河北医科大学法医学教研室 河北医科大学法医学教研室 河北医科大学法医学教研室 河北医科大学法医学教研室 河北医科大学法医学教研室
【分类号】：D919
【参考文献】
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本文编号：2039356
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