外切酶循环放大技术检测肿瘤标记物及其在分子逻辑门体系中的应用研究
发布时间：2021-08-01 11:57
本文基于核酸外切酶循环放大技术，实现了对血小板衍生因子（PDGF）和DNA等肿瘤标志物高灵敏、高选择性检测检测，并建立分子逻辑门体系。主要开展了以下两方面的工作：一、核酸外切酶级联循环放大技术检测血小板衍生因子本文建立了一种核酸外切酶级联循环放大技术，基于血小板衍生因子（PDGF-BB）与其适体的特异性识别作用，实现了对PDGF-BB的化学发光免标记高灵敏检测。该体系由双链DNA（核酸适体-受体）、两种发卡结构DNA分子，以及核酸外切酶组成。通过核酸适体与PDGF-BB的特异性识别并结合，运用ExoIII对双链结构的特异性剪切，实现核酸外切酶级联循环放大。反应后释放出大量的DNA酶，其与hemin结合形成辣根过氧化物DNA模拟酶（DNAzyme），采用luminol-H2O2化学发光反应体系检测，对PDGF-BB的检测限可达6.8×10-13M。本方法设计简单，实验条件温和且为均相反应，免标记成本低，效率高。对于具有适体序列的生物分子具有广泛适用性。二、核酸外切酶循环放大技术检测DNA及其在分子逻辑门体系中的应用研究基于核酸外切酶循环放大技术实现了对DNA的高灵敏检测，并用于分子逻辑门...
【文章来源】：青岛科技大学山东省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Exo-CARA法（循环IIIIIIII）免标记化学发光检测PDGF-BB的原理图
进而激活Recycle II。即， locker DNA与MB1的3'端互Exo III识别双链结构，进而发生剪切作用。当剪切完两条链，其中一条链就是blocker DNA，其继续与MNA的循环，称这个循环过程称为Recycle II，blocker这个循环中释放的另一条链命名它为链A，其作为，当链A与MB2的3'端互补结合，进而发生ExoIII的剪先前的结构分裂成两条链，其中一条链就是链A，其，称这个循环为Recycle III。这个循环中释放的另一blocker DNA序列，从而引发Recycle II。如此，三个B不断的积累。当反应完毕后，链A和链B中的DNAz合，形成HRP模拟酶，采用Luminol-H2O2化学发光体发光信号。量对实验体系影响的研究
后分别检测各用量下的化学发光强度，以此确定Exo如图2-2所示，在Exo III的用量在0~100U之间变化，度随着Exo III用量的增加而增加，当酶用量大于50U着酶用量而增加。因此，选择50 U作为最佳Exo III用时间对实验体系影响的研究时间是影响Luminol-H2O2-DNAzyme化学发光体系的Exo III反应时间为 10 min，20 min，30 min，45 m别检测不同时间下的化学发光强度，以此来确定Ex影响。如图2-3所示，体系的反应时间在0~90 min之时，化学发光强度随着时间的增强而增强，而当时间强度的变化就很不明显，因此，选择30 min作为体系
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于DNA/RNA的逻辑门与逻辑运算[J]. 俞洋,陆建华,王东方,裴昊,樊春海. 科学通报. 2013(02)
[2]DNA聚合酶δ与肿瘤的关系[J]. 阮细玲,吴琼,黄怡,李永继,徐恒. 临床与实验病理学杂志. 2012(12)
[3]限制性核酸内切酶的规范表达[J]. 王雪莹,郭国庆. 编辑学报. 2012(03)
[4]真核生物DNA连接酶Ⅲ的功能演化[J]. 靳春艳,盛自章,黄京飞. 中国科学技术大学学报. 2012(04)
[5]肝硬化出血患者血小板4项参数及凝血因子的动态变化[J]. 洪炜,杨宁,何江英,曲芬,毛远丽. 中国卫生检验杂志. 2011(09)
[6]胃癌及癌旁正常组织中微小RNA表达谱的检测[J]. 陆俊,宋军,徐溢新,孟松,白津,郑骏年,徐为. 中华实验外科杂志. 2011 (08)
[7]使用DNA分子实现逻辑门操控[J]. 戴闻. 物理. 2011(05)
[8]肝病患者凝血因子、血小板参数检测及临床意义[J]. 张秀琴. 现代诊断与治疗. 2011(02)
[9]肿瘤标记物在消化系统肿瘤诊断中的研究进展[J]. 刘庆峰,王涛,刘贵建. 中华临床医师杂志(电子版). 2011(05)
[10]微小RNA与肿瘤相关性研究[J]. 程文,高建平,张征宇. 医学研究生学报. 2011(02)
硕士论文
[1]基于核酸外切酶Ⅲ辅助信号放大的化学发光共振能量转移体系高灵敏检测核酸[D]. 陈春.陕西师范大学 2013
本文编号：3315483
【文章来源】：青岛科技大学山东省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Exo-CARA法（循环IIIIIIII）免标记化学发光检测PDGF-BB的原理图
进而激活Recycle II。即， locker DNA与MB1的3'端互Exo III识别双链结构，进而发生剪切作用。当剪切完两条链，其中一条链就是blocker DNA，其继续与MNA的循环，称这个循环过程称为Recycle II，blocker这个循环中释放的另一条链命名它为链A，其作为，当链A与MB2的3'端互补结合，进而发生ExoIII的剪先前的结构分裂成两条链，其中一条链就是链A，其，称这个循环为Recycle III。这个循环中释放的另一blocker DNA序列，从而引发Recycle II。如此，三个B不断的积累。当反应完毕后，链A和链B中的DNAz合，形成HRP模拟酶，采用Luminol-H2O2化学发光体发光信号。量对实验体系影响的研究
后分别检测各用量下的化学发光强度，以此确定Exo如图2-2所示，在Exo III的用量在0~100U之间变化，度随着Exo III用量的增加而增加，当酶用量大于50U着酶用量而增加。因此，选择50 U作为最佳Exo III用时间对实验体系影响的研究时间是影响Luminol-H2O2-DNAzyme化学发光体系的Exo III反应时间为 10 min，20 min，30 min，45 m别检测不同时间下的化学发光强度，以此来确定Ex影响。如图2-3所示，体系的反应时间在0~90 min之时，化学发光强度随着时间的增强而增强，而当时间强度的变化就很不明显，因此，选择30 min作为体系
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于DNA/RNA的逻辑门与逻辑运算[J]. 俞洋,陆建华,王东方,裴昊,樊春海. 科学通报. 2013(02)
[2]DNA聚合酶δ与肿瘤的关系[J]. 阮细玲,吴琼,黄怡,李永继,徐恒. 临床与实验病理学杂志. 2012(12)
[3]限制性核酸内切酶的规范表达[J]. 王雪莹,郭国庆. 编辑学报. 2012(03)
[4]真核生物DNA连接酶Ⅲ的功能演化[J]. 靳春艳,盛自章,黄京飞. 中国科学技术大学学报. 2012(04)
[5]肝硬化出血患者血小板4项参数及凝血因子的动态变化[J]. 洪炜,杨宁,何江英,曲芬,毛远丽. 中国卫生检验杂志. 2011(09)
[6]胃癌及癌旁正常组织中微小RNA表达谱的检测[J]. 陆俊,宋军,徐溢新,孟松,白津,郑骏年,徐为. 中华实验外科杂志. 2011 (08)
[7]使用DNA分子实现逻辑门操控[J]. 戴闻. 物理. 2011(05)
[8]肝病患者凝血因子、血小板参数检测及临床意义[J]. 张秀琴. 现代诊断与治疗. 2011(02)
[9]肿瘤标记物在消化系统肿瘤诊断中的研究进展[J]. 刘庆峰,王涛,刘贵建. 中华临床医师杂志(电子版). 2011(05)
[10]微小RNA与肿瘤相关性研究[J]. 程文,高建平,张征宇. 医学研究生学报. 2011(02)
硕士论文
[1]基于核酸外切酶Ⅲ辅助信号放大的化学发光共振能量转移体系高灵敏检测核酸[D]. 陈春.陕西师范大学 2013
本文编号：3315483
本文链接：https://www.wllwen.com/shekelunwen/ljx/3315483.html
