酶解卵清活性多肽的制备及其在细胞培养中的应用

发布时间：2019-12-06 15:05

【摘要】：卵清蛋白酶解制备的多肽具有抗氧化、抗菌、抗疲劳等作用,被广泛应用于食品保健领域。生物活性肽具有促细胞生长的作用,但卵清酶解制备的多肽在细胞培养方面的应用鲜有报道。本文采用高压酶解法,制备了卵清多肽复合物,研究了其理化性质和对贴壁细胞的促生长效果,为卵清多肽在细胞培养方面的应用提供了理论依据。论文首先简要介绍了生物活性肽、蛋白水解物和卵清蛋白水解物三个方面的制备方法和研究现状。其次以水解度为指标,通过酶筛选(碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰酶)、单因素试验和正交试验对高压酶解卵清蛋白的工艺参数进行了优化。结果表明:胰酶水解效果优于其他五种酶,水解最佳工艺为压力120MPa、温度50 ℃pH值7.0和酶/底物(E/S)=1:2.5(质量比),水解度最高可以达到45.13%。然后对制备的高压酶解卵清蛋白多肽的理化性质进行了研究。结果表明:高压酶解卵清多肽在pH值2-10之间具有较高的溶解性、热稳定性和起泡性,泡沫稳定性较低。氨基酸检测和分子量检测证明其水解物中含有大量有益于细胞生长的氨基酸,水解度较高。最后通过细胞传代培养、生长曲线测试、降血清测试、纤维素介质分离纯化等方法,检测了高压酶解卵清多肽对两种疫苗生产常用细胞BHK-21细胞和Marc-145细胞的促细胞生长效果。结果表明:添加0.25%卵清多肽后,两种细胞的最大增殖密度分别为6.69×10~5cells/mL和4.75×10~5cells/mL,是正常培养细胞的1.56倍和1.73倍;细胞倍增时间分别为21.25h和27.94h,比正常培养细胞分别缩短了 6.97h和4.24h。两种细胞均可以稳定传代15代以上,且生长形态无明显变化。试验还证实:添加0.25%的高压酶解卵清多肽可以减少细胞培养中的血清含量,这对降低疫苗等生物制品的生产成本具有重要意义。此外,分离纯化实验表明:自制的卵清水解多肽中可能含有抑制细胞生长的物质——EH4。如果在高压酶解卵清多肽中去除EH4后,是否其促细胞生长效果更明显,有待进一步研究。综上所述,本研究制备的高压酶解卵清多肽对两种动物细胞有促生长活性,具有在大规模细胞培养中应用的前景和开发价值。
【学位授予单位】：西北民族大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：Q813.1

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本文编号：2570429