兔瘟病毒的VP60截段基因原核表达及抗体检测金标试纸的初步研究

发布时间：2020-07-02 18:52

【摘要】：兔病毒性出血症(Rabbit hemorrhagic disease, RHD)又称兔瘟,是一种能够引起家兔出现呼吸系统症状以及快速死亡的一种急性高致病性传染病。兔群一旦感染,发病率和死亡率均可高达100%,是严重影响养兔业健康发展的重要兔病之一。本研究根据已发表RHDV基因组序列,针对VP60基因前900 bp片段(AB区)设计两条表达引物,通过RT-PCR扩增、酶切、连接转化构建重组表达质粒pCold TF-VP60,转化到BL21感受态细胞中,挑取阳性菌扩大培养,用IPTG (1mmol/L)进行诱导表达和条件优化,收集诱导表达菌体进行SDS-PAGE分析和Western-blotting鉴定,并进行重组蛋白的Ni-TED亲和层析法纯化和其反应原性ELISA检测。结果构建的重组表达质粒pCold TF-VP60在浓度为lmmol/L IPTG,诱导表达3-4h可获得约85.3 kD大小重组蛋白,表达重组蛋白的间接ELISA结果表明表达的重组蛋白能与免疫阳性RHDV抗体特异性结合特性,具有良好的反应活性。以羊抗兔IgG和鼠抗重组蛋白IgG分别标记T线和C线设计RHDV抗体检测试纸条,通过胶体金的制备、重组VP60蛋白标记、鼠源重组VP60抗体的制备,T线和C线蛋白用量的优化,特异性和敏感性实验,初步试制了可用于兔抗RHDV抗体检测的免疫胶体金试纸条,结果显示研制的胶体金试纸条具有良好的灵敏性和特异性,其免疫血清灵敏度可达到1：16；除了兔抗RHDV血清的检测线出现红色条带外,其他阴性血清、兔抗巴氏杆菌血清和PBS液检测线均无显色条带,为RHDV的防控提供了一种新的检测技术。
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.65

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本文编号：2738550