流感病毒M1与NA蛋白相互作用及其在病毒出芽中的作用

发布时间：2020-07-03 21:19

【摘要】：流感病毒是一种囊膜病毒,各组分在细胞质膜组装并以出芽形式释放病毒。之前有报道显示M1蛋白无法单独出芽,必须与表面蛋白相互作用被携带出芽,而相互作用的区域和这种相互作用如何影响病毒粒子的出芽尚不清楚。这里我们利用双分子荧光互补实验和体外病毒出芽实验对以上问题进行了如下研究:1.将病毒A/WSN/1933(H1N1)感染扩增于MDCK细胞,提取病毒RNA并反转录cDNA,以cDNA为模板PCR扩增得到NA和M1及其各截段基因片段。将所得基因片段分别克隆入BIFC工作载体和Flag、ha真核表达载体。2.利用双分子荧光互补实验对M1和NA的相互作用进行了研究,转染于293T细胞的VC-M1与VN-NA可产生较强荧光信号,说明二者间存在互作。体外出芽实验证实NA蛋白能够独立出芽,M1蛋白无法独立出芽,而M1蛋白可以与NA蛋白相互作用并被携带共同出芽。3.利用双分子荧光互补实验和体外出芽实验确定M1蛋白与NA蛋白相互作用的区域,结果表明M1蛋白N端完整的160个氨基酸是与NA的互作区域,60～252aa不参与互作。4.对M1蛋白1～160aa区域两端分别缺失20aa会降低其在细胞中的表达量,表明M1蛋白N端160aa对其蛋白稳定性起关键作用。与此同时,对M1蛋白的晶体结构分析也证实了其1～160aa对维持蛋白结构稳定的重要性。本研究探明了 M1蛋白和NA蛋白的相互作用区域并揭示这种相互作用对对病毒出芽的影响,进一步完善了流感病毒的出芽机制。
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.65

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本文编号：2740186