代谢型谷氨酸受体6在黑素细胞形态及黑素小体转运中的作用研究

发布时间：2020-08-20 10:25

【摘要】：目的:探讨代谢型谷氨酸受体6(metabotropic glutamate receptor 6,mGluR6)对黑素细胞形态影响及其在黑素细胞-角质形成细胞共培养体系中对黑素转运的作用及其相关机制。方法:1.原代培养纯化黑素细胞,合成慢病毒载体Lv-mGluR6-shRNA,对黑素细胞进行转染并敲除mGlu R6表达。2.免疫印迹法(Western blotting)检测慢病毒转染后mGlu R6的表达情况。3.扫描电镜观察Lv-mGluR6-shRNA转染后黑素细胞的伪足及树突形态变化。4.建立体外黑素细胞与HaCat角质形成细胞共培养体系。扫描电镜观察LvmGluR6-shRNA转染后共培养体系中丝状伪足连接的变化;NaOH法测定共培养体系中角质形成细胞中的黑素含量;运用免疫荧光双染色,流式细胞术检测黑素小体转运效率。5.免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜下观察Lv-mGluR6-shRNA转染后细胞骨架蛋白β-tublin的分布变化和共培养体系下黑素细胞在角质形成细胞中分布含量的区别。结果:1.扫描电镜发现黑素细胞在慢病毒转染后,树突变短,二、三级树突数量减少,细胞表面伪足数目明显减少。2.黑素细胞与角质形成细胞的共培养体系中,两细胞间以丝状伪足相连,转染后的共培养体系中,相连接的丝状伪足数量明显减少。3.共培养48小时后,NaOH法测定转染组角质形成细胞中黑素含量明显少于对照组。4.使用NKI/beteb抗体标记黑素小体、广谱细胞角蛋白抗体标记角质形成细胞,激光共聚焦显微镜观察角质形成细胞中分布黑素小体。与对照组相比,慢病毒转染后角质形成细胞中的黑素小体数目明显减少;流式细胞术检测显示黑素小体在角质形成细胞中的含量随时间递增,与对照组相比,转染组转运效率明显下降。5.激光共聚焦显微镜观察β-tublin抗体标记的细胞骨架蛋白在转染组和对照组有明显差异;转染组骨架蛋白呈点状分布,不呈网状结构相连接;对照组骨架蛋白成管束状分布均匀。结论:1.mGluR6的表达与黑素细胞骨架蛋白分布及黑素细胞形态密切相关。2.mGluR6的表达与共培养体系中丝状伪足的形成有关。3.mGluR6的表达影响共培养体系中黑素小体的转运。4.mGluR6的表达影响黑素小体的转运,其可能机制为:(1)通过改变黑素细胞骨架蛋白分布和形态影响黑素小体转运。(2)通过改变共培养体系中丝状伪足的形成来影响黑素小体转运。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R339.11

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本文编号：2797864