代谢型谷氨酸受体6对HaCaT细胞吞噬功能的调节作用的研究

发布时间：2020-10-29 11:19

　　 目的:探讨代谢型谷氨酸受体6对人角质形成细胞吞噬功能的调节作用的影响。方法:1.人角质形成细胞体外培养。2.蛋白免疫印迹法检测人角质形成细胞系(HaCaT)中代谢型谷氨酸受体6(metabotropic glutamate receptor 6,mGluR6)的表达。3.慢病毒转染。利用慢病毒转染法下调mGluR6基因在人角质形成细胞系中的表达,建立低表达稳转株(Lv-shmGluR6)及阴性对照(Lv-shCon)。5.利用扫描电镜观察Lv-shmGluR6组和Lv-shCon组细胞表面形态,观察细胞表面叶状伪足数量的变化。6.用免疫荧光染色法处理各组细胞,用共聚焦显微镜观察细胞微管蛋白的分布及变化。7.利用荧光微球模拟人角质形成细胞吞噬黑素小体的模型,并用共聚焦显微镜观察吞噬情况。9.用流式细胞仪检测Lv-shmGluR6组和Lv-shCon组细胞吞噬荧光微球能力。结果:1.HaCaT细胞中存在mGluR6的表达且表达量丰富。2.慢病毒转染后HaCaT细胞中mGluR6蛋白水平明显降低,mGluR6下调稳转株构建成功。3.mGluR6下调后HaCaT细胞表面叶状伪足数量明显减少。4.mGluR6下调后HaCaT细胞微管蛋白在细胞内的分布明显变化,向细胞周边聚集,靠近核周部位明显减少,靠近细胞膜部位密集增多。5.mGluR6下调后HaCaT细胞吞噬荧光微球的量明显减少。6.用荧光微球模拟HaCaT细胞吞噬黑素小体的模型,流式细胞仪检测出mGluR6下调后其吞噬荧光微球的量减少。结论:1.HaCaT细胞中有mGluR6的表达。2.下调mGluR6后HaCaT细胞表面伪足数量减少。与此同时细胞的骨架蛋白分布也发生明显变化,在核周的分布减少,多向细胞边缘聚集。3.利用荧光微球成功模拟出HaCaT细胞吞噬黑素小体的模型。证明了HaCaT吞噬作用可能是黑素小体转运的一个重要机制。4.利用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪分别定性和定量的检测出下调mGluR6后HaCaT吞噬荧光微球的能力下降。证明了mGluR6可能是影响HaCaT细胞吞噬作用的因素,发现了一个影响黑素小体转运的可能的新机制,为色素性疾病的基因治疗提供一个新的思路。
【学位单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：R329.2
【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
材料和方法
结果
讨论
结论
参考文献
病例报告
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    前言
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    讨论
    结论
    参考文献
综述
    参考文献
致谢

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本文编号：2860828