狂犬病病毒糖蛋白、磷蛋白、基质蛋白的真核表达及初步应用

发布时间：2020-12-15 05:42

　　狂犬病是由狂犬病病毒（Rabies Virus,RABV）感染引起的一种人畜共患的急性传染病。感染者发病后一旦出现显著的神经系统症状,几乎100%死亡。狂犬病在发展中国家仍是对人类健康的严重威胁。目前对组成狂犬病病毒主要结构蛋白的功能及致病机理的研究仍不完全明确。掌握大量有关病毒蛋白与宿主蛋白相互作用的信息,将有助于揭示病毒在宿主上的致病过程的机制。然而,缺乏适宜的单克隆或多克隆抗体严重阻碍了我们的研究步伐,适用抗体的开发已成为相关研究的先决条件。本研究首先对NCBI提供的RABV CVS毒株的三个结构蛋白基因的原始序列用JCAT软件进行密码子优化。根据对HEK密码子的偏爱,稀有密码子被HEK偏爱密码子代替,而不改变氨基酸序列,但还要考虑到GC含量以及避免被酶切水解等要素,最终尽可能地使用宿主偏爱的密码子。合成的基因序列的5’和3’末端分别设计有BamHI和EcoRI消化位点,并在5’末端引入了Flag标签,以方便后续的蛋白质纯化。在不表达冗余序列的情况下,在3’端引入了终止密码子,并优化了密码子适应指数（CAI）,以增加蛋白质表达。经DNAMAN软件翻译后,确认氨基酸序列同源性为10... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

真核构建RABV三种结构蛋白的质粒结构图

第二篇研究内容第一章狂犬病毒结构蛋白的基因序列优化及表达结果23AAATTCCAATTGCTAGTCGAGGCCGACAAGCTAAGCAAAATCATGCAAGATGACTTGGAT|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||AAATTCCAACTGCTGGTGGAAGCAGATAAACTCTCCAAGATCATGCAGGACGACCTCGATKFQLLVEADKLSKIMQDDLDCGCTACACATCATGCTAA||||||||||||AGGTATACATCCTGTTAGRYTSC1.3.3pcDNA3.1-Flag-RABVG,M,N,P优化前后密码子适应性分析结果研究表明，大量稀有密码子是蛋白质表达水平升高的重要原因。这样的密码子将阻碍核糖体的运动。因此，将降低表达宿主中外源基因的转录和翻译水平。用优先密码子替换稀有密码子并改善mRNA稳定性可以改善蛋白质表达水平。基于这样的研究，密码子被优化以增加该基因在HEK中的表达水平。密码子适应指数（CAI）是指编码区域中的密码子与最佳密码子使用频率之间的对应程度。取值范围是01。取值越大，基因表达水平越高。从图中可以看出，优化后的CAI值明显高于优化前。RABVG未优化密码子适应指数：0.22参考组：Homosapiens(Mamalian/HEK)密码子使用频率表图1.2RABVG序列未优化的密码子适应指数Figure1.2RABVGUnoptimizedcodonadaptationindicesforsequence

第二篇研究内容第一章狂犬病毒结构蛋白的基因序列优化及表达结果24RABVG优化后密码子适应指数：0.79参考组：Homosapiens(Mamalian/HEK)密码子使用频率表图1.3RABVG序列优化后的密码子适应指数Figure1.3RABVGcodonadaptationindexaftersequenceoptimizationRABVM未优化密码子适应指数：0.21参考组：Homosapiens(Mamalian/HEK)密码子使用频率表图1.4RABVM序列未优化的密码子适应指数Figure1.4RABVMUnoptimizedcodonadaptationindicesforsequence


本文编号：2917756