基于CRISPR/Cas9技术的小鼠淋巴细胞Foxp3基因的定向编辑

发布时间：2020-12-20 23:36

　　CRISPR/Cas系统是细菌和古细菌在不断进化的过程中产生的适应性的免疫防御机制,用来保护自身的基因组免受外源核酸如噬菌体、病毒等的干扰和破坏。CRISPR/Cas系统作为一套适应性免疫系统,应用CRISPR RNA（crRNA）以碱基互补的形式引导Cas蛋白识别入侵的外源基因组,并对其DNA进行剪切。根据Cas蛋白的序列和结构将CRISPR/Cas系统分为I型、II型和III型。其中I型和III型系统都需要多个Cas蛋白原件,而II型仅仅需要Cas9蛋白。II型CRISPR/Cas系统（即CRISPR/Cas9系统）已被发展成为一套理想的程序化的基因编辑工具。本文的主要目的是针对Foxp3基因设计靶位点gRNA,利用CRISPR/Cas9系统构建靶向修饰载体系统,对Foxp3基因位点进行编辑,然后探讨Foxp3的生物学功能,利用CRISPR将Foxp3基因敲除后,以Foxp3敲除细胞为研究对象,进行各项生物学特性检测。我们还将此技术应用在肿瘤小鼠模型中,以期降低肿瘤细胞中的Foxp3基因的表达,阻止Treg细胞的产生,抑制肿瘤细胞在小鼠体内的生长。本文使用的主要方法和结果:1、利用... 

【文章来源】：鲁东大学山东省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PX458质粒模式结构图

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图 2 酶切体系电泳结果igure 2 Enzyme cleavage electrophoresis result PX458 酶切电泳结果。实验条带清晰泳条带可用于胶回收实验。定paⅠ和 EcoRV 处理载体质粒，得到 4。1%琼脂糖凝胶，设置 110 v 电压，


本文编号：2928770