日本三角涡虫HSP70家族相关基因功能研究

发布时间：2020-12-22 01:48

　　日本三角涡虫（Dugesia japonica）隶属扁形动物门（Platyhelminthes）,涡虫纲（Turbellaria）,在动物系统演化中占有重要地位,并且具有极强的损伤修复及再生能力。但目前,其再生机制并不清楚。本文利用生物信息学、Real-time PCR、原位杂交和RNA干扰等技术对日本三角涡虫转录组中表达量较高的热休克蛋白70家族基因Djhsp70a、Djhsp70b、Djhsp70c、Djhsp70d进行了定量、定位和功能分析,结果如下:（1）首先对四基因进行温度、切割损伤和离子液体应激处理,结果表明:涡虫在培养温度低于或者高于20℃,切割损伤和离子液体处理应激条件下,四基因表达量均明显上调。（2）Djhsp70a生物信息学分析发现:DjHSP70a蛋白是稳定的亲水性蛋白,具有多个磷酸化位点和糖基化位点,含有HSP70家族标签3和末端高度保守的EEVD序列;整体原位杂交结果显示:Djhsp70a基因在整体以及再生涡虫中广泛表达,其中整体涡虫身体两侧有较强杂交信号,再生涡虫芽基处有杂交信号且再生5d和7d时杂交信号最强;Djhsp70a基因干扰后,2/3整体涡虫咽后部... 

【文章来源】：河南师范大学河南省

【文章页数】：98 页

【学位级别】：硕士

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缩略语
摘要
ABSTRACT
1 引言
    1.1 日本三角涡虫概述
    1.2 涡虫再生研究进展
    1.3 热休克蛋白70的研究进展
        1.3.1 热休克蛋白70的分类
        1.3.2 HSP70的结构和生物学特征
        1.3.3 HSP70的生物学功能
    1.4 立题依据与意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验材料的采集与培养
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 实验试剂
        2.1.4 实验所用引物
    2.2 实验方法与步骤
        2.2.1 日本三角涡虫总RNA的提取与检测
        2.2.2 一般反转录模板的制备
        2.2.3 Real-time-PCR模板的制备
        2.2.4 Real-time PCR扩增
        2.2.5 HSP70家族各目的基因的生物信息学分析及系统进化树构建
        2.2.6 应激反应过程中四目的基因的表达变化
        2.2.7 HSP70家族各目的基因的原位杂交
        2.2.8 HSP70家族各目的基因的RNA干扰
3 实验结果
    3.1 cDNA模板的制备
        3.1.1 总RNA的提取
        3.1.2 反转录模板cDNA的检测
    3.2 热休克蛋白70家族四基因的生物信息学分析
        3.2.1 Djhsp70a基因生物信息学分析
        3.2.2 Djhsp70b基因生物信息学分析
        3.2.3 Djhsp70c基因生物信息学分析
        3.2.4 Djhsp70d基因的生物信息学分析
        3.2.5 HSP70家族四基因对应蛋白质的同源性和进化分析
    3.3 不同应激条件下四基因的表达量变化
        3.3.1 不同温度条件处理
        3.3.2 切割损伤处理
        3.3.3 不同浓度离子液体处理
    3.4 HSP70家族四基因的整体原位杂交结果
        3.4.1 Djhsp70a基因整体原位杂交结果
        3.4.2 Djhsp70b基因整体原位杂交结果
        3.4.3 Djhsp70c基因整体原位杂交结果
        3.4.4 Djhsp70d基因整体原位杂交结果
    3.5 四基因RNA干扰结果
        3.5.1 Djhsp70a基因RNA干扰结果
        3.5.2 Djhsp70b基因RNA干扰结果
        3.5.3 Djhsp70c基因RNA干扰结果
        3.5.4 Djhsp70d基因RNA干扰结果
4 讨论
    4.1 四基因在应激反应中的保护作用
    4.2 四基因的结构分析
    4.3 四基因的表达及功能分析
5 结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文和参与的课题



本文编号：2930912