貉细小病毒样颗粒的研究

发布时间：2020-12-29 05:10

　　貉细小病毒（Raccoon Dog Parvovirus,RDPV）属于细小病毒科,细小病毒属,通常会引起的一种急性,高接触性传染病,具有较高的病发率和致死率。自RDPV被发现以来,我国各地先后均有貉细小病毒性肠炎的报道,严重养危害貉业养殖的发展。目前国内RDPV的预防主要采用犬细小病毒弱毒疫苗或水貂肠炎病毒灭活疫苗,但保护率低,免疫效果一般。因此,研制特异性针对RDPV的安全,高效疫苗势在必行。为了利用大肠杆菌系统可溶性表达RDPV VP2蛋白,获得RDPV病毒样颗粒（Virus-like Particles,VLPs）。本研究首先根据大肠杆菌对密码子的偏爱性,对RDPV VP2基因序列进行优化并合成,构建重组表达质粒pET30a-VP2,转化E.coli ER2566感受态细胞。SDS-PAGE检测显示,VP2蛋白主要以包涵体形式表达;为了提高VP2蛋白可溶性表达,将重组表达质粒pET30a-VP2与分子伴侣pTf16共同转入E.coli ER2566感受态细胞进行诱导表达,通过Western-Blot鉴定RDPV VP2蛋白,并对表达条件进行优化。结果表明,RDPV VP2蛋白得... 

【文章来源】：长春工业大学吉林省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

衣壳蛋白VP2三级结构分子模型[24]

第3章结果22第3章结果3.1重组表达质粒pET30a-VP2构建及鉴定将成功构建的重组表达质粒pET30a-VP2经NdeI和HindIII酶切后，进行0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测。结果见图3.1，在1760bp左右有特异性片段显示，与RDPVVP2基因的预期大小相符。将鉴定成功的重组质粒pET30a-VP2测序结果进行比对，比对结果见图3.2，插入到载体pET30a的VP2序列与RDPVVP2基因序列一致。M.1kbDNALadder；1.重组表达质粒的NdeI和HindIII双酶切图3.1重组表达质粒pET30a-VP2的酶切鉴定图3.2重组表达质粒pET30a-VP2的测序结果比对M11500bp2000bp3000bp5000bp1760bp5400bp6000bp

第3章结果22第3章结果3.1重组表达质粒pET30a-VP2构建及鉴定将成功构建的重组表达质粒pET30a-VP2经NdeI和HindIII酶切后，进行0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测。结果见图3.1，在1760bp左右有特异性片段显示，与RDPVVP2基因的预期大小相符。将鉴定成功的重组质粒pET30a-VP2测序结果进行比对，比对结果见图3.2，插入到载体pET30a的VP2序列与RDPVVP2基因序列一致。M.1kbDNALadder；1.重组表达质粒的NdeI和HindIII双酶切图3.1重组表达质粒pET30a-VP2的酶切鉴定图3.2重组表达质粒pET30a-VP2的测序结果比对M11500bp2000bp3000bp5000bp1760bp5400bp6000bp


本文编号：2945073