细胞叠套结构（cell-in-cell structure）介导细胞间mRNA传递的研究

发布时间：2020-12-30 18:07

　　背景哺乳动物细胞间mRNA传递的现象发现已久,由于缺乏有效的研究模型和手段,细胞间mRNA传递的机制以及mRNA在到达受体细胞后是否翻译成蛋白质并发挥其生物学功能仍有待研究。细胞叠套结构（cell-in-cell structure,CICs）是指一个或多个活细胞钻入另外一个活细胞后形成的细胞套细胞结构,钻入细胞（效应细胞）的主要命运是在被钻入细胞（靶细胞）中死亡（细胞胞内死亡）,目前大多数研究都集中在cell-in-cell的发生机制以及内部细胞的死亡方式上,而对于外部靶细胞命运的研究及效靶细胞间是否存在mRNA等生物分子的传递则因缺少研究模型而长期受限。目的利用Cre-loxP重组酶系统,以cell-in-cell结构为研究模型,研究细胞间mRNA的交流和传递过程及其在靶细胞内是否能够发挥生物学功能,并探讨cell-in-cell在细胞通讯中所发挥的作用。方法构建Plvx-IRES-Neo-Cre慢病毒重组质粒,在HEK293FT细胞中包装病毒,将包装好的病毒感染不同的上皮细胞和肿瘤细胞系,经抗生素筛选后,利用免疫荧光筛选和鉴定高表达Cre的细胞,然后建立表达Cre的单克隆细胞株（... 

【文章来源】：新乡医学院河南省

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

基于Cre-loxP重组酶系统的细胞间信息传递研究模型示意图

新乡医学院硕士学位论文262.结果2.1成功构建携带loxP-DsRed-loxP-eGFP序列的靶细胞和稳定表达Cre蛋白的效应细胞将质粒转染后的效应细胞及病毒感染后的靶细胞用相应抗生素进行加压筛选，得到稳株细胞利用有限稀释法进行单克隆细胞的制备，培养3-4w后，将挑选出的单克隆阳性细胞孔进行扩增。取部分制备的单克隆靶细胞接种于爬片上过夜培养，固定、封片后共聚焦显微镜下观察并筛选出全部表达DsRed荧光而不表达eGFP荧光的单克隆细胞株（图2A）；同样地，取部分初步制备的单克隆效应细胞进行免疫细胞化学染色，镜下挑选出Cre蛋白高表达的单克隆细胞株，用Westernblot对挑选的细胞株再次加以验证（图2B和2C）；结果提示我们构建的单克隆效应细胞与靶细胞均符合预期。图2构建的效应细胞及靶细胞。A：携带loxP-DsRed-loxP-eGFP序列的MCF7细胞荧光表达情况（红色：DsRed细胞自带荧光；蓝色：DAPI染色指示细胞核）；B：稳定表达Cre蛋白的PLC/PRF/5细胞的荧光表达情况（紫色：抗Cre抗体；蓝色：DAPI染色指示细胞核）；C：稳定表达Cre蛋白的MCF10a细胞的Westernblot验证结果2.2Cre蛋白可以介导靶细胞发生基因重组并表达eGFP信号Cre蛋白能够识别细胞基因组中的loxP位点并将该位点之间的DNA切下，使细

Cre-loxP重组酶系统的验证

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：2948071