成都市犬细小病毒的分子检测及病原生物学特征
发布时间：2021-01-01 14:11
犬细小病毒（Canine parvovirus,CPV）感染犬主要表现为出血性肠炎,对幼犬的致死率高达70%,该病呈全球性流行。CPV极易发生变异,自20世纪70年代后期出现至今,已出现了多种抗原型流行毒株,包括CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c以及New CPV-2a、New CPV-2b等。对流行毒株的流行病学调查和病原特征研究有助于该病的防控,本研究的目的是调查成都市CPV的流行情况及病原生物学特征。主要研究结果如下:1.CPV的分布及其混合感染情况为了解成都市CPV的感染情况,采用CPV特异PCR方法,对2016-2018年采自成都市6家宠物医院176份幼犬腹泻粪便样本进行检测,并对CPV阳性样本中犬冠状病毒（Canine coronavirus,CCoV）、犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）、犬轮状病毒（Canine rotavirus,CRV）、犬微小病毒（Minute virus of canines,MVC）、犬腺病毒2型（Canine Adenovirus type 2,CAV-2）、犬圆环病毒（CanineCircovirus,...
【文章来源】：西南民族大学四川省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CPV的基因组结构图
成都市犬细小病毒的分子检测及病原生物学特征20：代表本研究获得的CPVVP2基因序列;：CPVVP2geneinthisstudy;图2-3基于VP2基因核苷酸序列系统发育树（N-J）Fig2-3Phylogenetictree(N-J)basedonthecompleteVP2geneofCPV-22.3.2VP2基因片段的氨基酸位点变化本研究所鉴定的60个VP2基因片段所推导的氨基酸序列片段与参考毒株相比共出现了4个氨基酸位点的突变，分别为Ser297Ala100%（60/60）、Tyr324Ile96.67%（58/60）、Gln370Arg16.67%（10/60）、Thr440Ala78.33%（47/60），60个氨基酸序列中除2个NewCPV-2b型毒株外的58个毒株均在在第324位氨基酸位点发生了突变，而第370位氨基酸位点的突变仅出现在了所有CPV-2c型毒株中（10/10）；第440位氨基酸位点在60个CPV毒株中共有47（78.3%）个存在位点突变，分别为95.35%（41/43）的NewCPV-2a型毒株、71.43%（5/7）的NewCPV-2b
成都市犬细小病毒的分子检测及病原生物学特征32M:DNAMarker;P:阳性对照;N:阴性对照;1~3:SC-16/2017、SC-13/2017、SC-14/2017分离株目的条带M:DNAMarker;P:Positivecontrol;N:Negativecontrol;1~3：SC-16/2017、SC-13/2017、SC-14/2017isolates图3-2分离毒株第5代培养物的PCR检测结果Fig3-2PCRdetectionresultsofthefifthgenerationcultureofisolatedstrains对第5代细胞培养液的PCR扩增产物测序分型显示与最初接毒样本的抗原型相同（VP2基因第426位氨基酸位点变化情况），即SC-16/2017为NewCPV-2a型、SC-13/2017为NewCPV-2b型、SC-14/2017为CPV-2c型（图3-3）。图3-3分离株PCR产物测序结果Fig3-3PCRproductsequencingresultsofisolates2.2.2间接免疫荧光鉴定CPV各分离毒株的间接免疫荧光试验表明，荧光显微镜下观察可见分离毒株感染细胞具有亮绿色的特异性荧光，而阴性对照未出现绿色荧光，见图3-4。
【参考文献】：
期刊论文
[1]成都地区犬细小病毒分子流行病学调查[J]. 陈小蓉,杨宁,张燕红,黄坚,杨晓农. 中国畜禽种业. 2019(09)
[2]犬细小病毒2型变异株对高母源抗体犬的致病性[J]. 甘军纪,田晓彦,高巍,刘秀梵. 中国兽医学报. 2019(03)
[3]肠炎型犬细小病毒的分离鉴定及病毒滴度测定[J]. 吴双,朱善元,郭长明,秦枫,左伟勇,王永娟,洪伟鸣,王安平. 江苏农业科学. 2018(23)
[4]南宁地区犬细小病毒VP2基因的克隆及遗传进化分析[J]. 徐闰,黄华旭,徐小明,李政泰,马麟,劳小香,吴显实. 中国畜牧兽医. 2018(12)
[5]犬细小病毒CPV-BJ03/17株分离鉴定及VP2基因遗传进化分析[J]. 王洋,胡博,鲁荣光,吕爽,赵辉,廉士珍,闫喜军. 中国畜牧兽医. 2018(07)
[6]卵黄抗体的研究进展[J]. 曹思婷,郭亚男,何生虎,张鑫,王爽,邵倩,郭鹏辉. 黑龙江畜牧兽医. 2018(09)
[7]犬圆环病毒及犬细小病毒双重PCR检测方法的建立[J]. 曹亮,孙文超,鲁会军,田明尧,刘云霞,谢长占,赵冠宇,韩继成,肖鹏鹏,张金勇,钱爱东,金宁一. 中国兽医科学. 2017(09)
[8]贵阳地区犬细小病毒VP2基因的克隆及遗传进化分析[J]. 陈强,嵇辛勤,段志强,阮涌,雷云,龙丹丹,胡焱,万彪. 中国畜牧兽医. 2017(04)
[9]犬细小病毒单克隆抗体在治疗犬细小病毒病上的应用[J]. 王国明. 中国畜牧兽医文摘. 2017(04)
[10]吉林省犬细小病毒流行毒株的分离及VP2基因序列分析[J]. 张双,伊淑帅,王一鸣,郭梦茹,李响,胡桂学. 中国兽药杂志. 2017(03)
硕士论文
[1]犬细小病毒单克隆抗体的制备与应用[D]. 李月华.南京农业大学 2014
[2]抗CPV高免血清的制备及疗效观察[D]. 袁听.四川农业大学 2013
[3]抗CPV-2a卵黄抗体的制备及其毒理学评价[D]. 魏胜男.四川农业大学 2013
[4]犬瘟热病毒和犬细小病毒高免卵黄抗体的制备及其壳聚糖微球的研究[D]. 张婧兰.南京农业大学 2009
[5]犬细小病毒（CPV）的分离鉴定及其卵黄抗体（IgY）治疗制剂的研制[D]. 刘志强.石河子大学 2008
[6]犬细小病毒单克隆抗体在治疗犬细小病毒病上的应用研究[D]. 王彤光.西北农林科技大学 2003
本文编号：2951435
【文章来源】：西南民族大学四川省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CPV的基因组结构图
成都市犬细小病毒的分子检测及病原生物学特征20：代表本研究获得的CPVVP2基因序列;：CPVVP2geneinthisstudy;图2-3基于VP2基因核苷酸序列系统发育树（N-J）Fig2-3Phylogenetictree(N-J)basedonthecompleteVP2geneofCPV-22.3.2VP2基因片段的氨基酸位点变化本研究所鉴定的60个VP2基因片段所推导的氨基酸序列片段与参考毒株相比共出现了4个氨基酸位点的突变，分别为Ser297Ala100%（60/60）、Tyr324Ile96.67%（58/60）、Gln370Arg16.67%（10/60）、Thr440Ala78.33%（47/60），60个氨基酸序列中除2个NewCPV-2b型毒株外的58个毒株均在在第324位氨基酸位点发生了突变，而第370位氨基酸位点的突变仅出现在了所有CPV-2c型毒株中（10/10）；第440位氨基酸位点在60个CPV毒株中共有47（78.3%）个存在位点突变，分别为95.35%（41/43）的NewCPV-2a型毒株、71.43%（5/7）的NewCPV-2b
成都市犬细小病毒的分子检测及病原生物学特征32M:DNAMarker;P:阳性对照;N:阴性对照;1~3:SC-16/2017、SC-13/2017、SC-14/2017分离株目的条带M:DNAMarker;P:Positivecontrol;N:Negativecontrol;1~3：SC-16/2017、SC-13/2017、SC-14/2017isolates图3-2分离毒株第5代培养物的PCR检测结果Fig3-2PCRdetectionresultsofthefifthgenerationcultureofisolatedstrains对第5代细胞培养液的PCR扩增产物测序分型显示与最初接毒样本的抗原型相同（VP2基因第426位氨基酸位点变化情况），即SC-16/2017为NewCPV-2a型、SC-13/2017为NewCPV-2b型、SC-14/2017为CPV-2c型（图3-3）。图3-3分离株PCR产物测序结果Fig3-3PCRproductsequencingresultsofisolates2.2.2间接免疫荧光鉴定CPV各分离毒株的间接免疫荧光试验表明，荧光显微镜下观察可见分离毒株感染细胞具有亮绿色的特异性荧光，而阴性对照未出现绿色荧光，见图3-4。
【参考文献】：
期刊论文
[1]成都地区犬细小病毒分子流行病学调查[J]. 陈小蓉,杨宁,张燕红,黄坚,杨晓农. 中国畜禽种业. 2019(09)
[2]犬细小病毒2型变异株对高母源抗体犬的致病性[J]. 甘军纪,田晓彦,高巍,刘秀梵. 中国兽医学报. 2019(03)
[3]肠炎型犬细小病毒的分离鉴定及病毒滴度测定[J]. 吴双,朱善元,郭长明,秦枫,左伟勇,王永娟,洪伟鸣,王安平. 江苏农业科学. 2018(23)
[4]南宁地区犬细小病毒VP2基因的克隆及遗传进化分析[J]. 徐闰,黄华旭,徐小明,李政泰,马麟,劳小香,吴显实. 中国畜牧兽医. 2018(12)
[5]犬细小病毒CPV-BJ03/17株分离鉴定及VP2基因遗传进化分析[J]. 王洋,胡博,鲁荣光,吕爽,赵辉,廉士珍,闫喜军. 中国畜牧兽医. 2018(07)
[6]卵黄抗体的研究进展[J]. 曹思婷,郭亚男,何生虎,张鑫,王爽,邵倩,郭鹏辉. 黑龙江畜牧兽医. 2018(09)
[7]犬圆环病毒及犬细小病毒双重PCR检测方法的建立[J]. 曹亮,孙文超,鲁会军,田明尧,刘云霞,谢长占,赵冠宇,韩继成,肖鹏鹏,张金勇,钱爱东,金宁一. 中国兽医科学. 2017(09)
[8]贵阳地区犬细小病毒VP2基因的克隆及遗传进化分析[J]. 陈强,嵇辛勤,段志强,阮涌,雷云,龙丹丹,胡焱,万彪. 中国畜牧兽医. 2017(04)
[9]犬细小病毒单克隆抗体在治疗犬细小病毒病上的应用[J]. 王国明. 中国畜牧兽医文摘. 2017(04)
[10]吉林省犬细小病毒流行毒株的分离及VP2基因序列分析[J]. 张双,伊淑帅,王一鸣,郭梦茹,李响,胡桂学. 中国兽药杂志. 2017(03)
硕士论文
[1]犬细小病毒单克隆抗体的制备与应用[D]. 李月华.南京农业大学 2014
[2]抗CPV高免血清的制备及疗效观察[D]. 袁听.四川农业大学 2013
[3]抗CPV-2a卵黄抗体的制备及其毒理学评价[D]. 魏胜男.四川农业大学 2013
[4]犬瘟热病毒和犬细小病毒高免卵黄抗体的制备及其壳聚糖微球的研究[D]. 张婧兰.南京农业大学 2009
[5]犬细小病毒（CPV）的分离鉴定及其卵黄抗体（IgY）治疗制剂的研制[D]. 刘志强.石河子大学 2008
[6]犬细小病毒单克隆抗体在治疗犬细小病毒病上的应用研究[D]. 王彤光.西北农林科技大学 2003
本文编号：2951435
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