SS31对ARPE-19细胞线粒体功能及凋亡保护作用的研究

发布时间：2021-01-01 14:29

　　目的初步探究线粒体靶向肽SS31对ARPE-19细胞的线粒体功能及凋亡的保护作用。方法用不同浓度的H₂O₂（0,100,150,200,250,300,500μmol/L）处理ARPE-19细胞24h,用MTT法检测细胞活性并选择最适浓度建立氧化损伤模型,再用不同浓度的SS31（10nM,100nM,1μmol/L）预处理细胞2h,通过MTT法测定细胞活力并选择SS31的最佳保护浓度。在倒置相差显微镜下观察ARPE-19细胞形态。在荧光显微镜下观察ARPE-19细胞DAPI染色结果。通过Annexin-V/PI染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。用MitoSOX red探针染色细胞,在荧光显微镜检测活性氧（ROS）的释放水平。用DCFH-DA探针和流式细胞仪检测ROS的释放水平。用JC-1荧光探针和流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位的变化。用RT-PCR技术测定ARPE-19细胞凋亡相关基因（Bax,Caspase-3和Bcl-2）的表达水平,通过Real-time PCR技术测定这三种基因mRNA水平。使用单因素方差分析（ANOVA）方法,应用... 

【文章来源】：西安医学院陕西省

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【学位级别】：硕士

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不同浓度H2O2对ARPE-19细胞活性的影响

西安医学院临床医学硕士专业学位论文28图1A不同浓度H2O2对ARPE-19细胞活性的影响注:cellviability表示细胞活性，通过酶联免疫检测仪检测不同H2O2浓度作用下的ARPE-19细胞活性，结果以均值±标准差来表示。*表示与正常对照组比较，P＜0.05,差异具有统计学意义,n=9。图1B倒置相差显微镜下观察ARPE-19细胞形态（×200）注：在倒置相差显微镜下观察示，随着H2O2浓度的增加，与空白对照组相比，ARPE-19细胞活细胞数目逐渐减少，凋亡细胞数目逐渐增加，细胞形态趋于皱缩。3.2不同浓度SS31对ARPE-19细胞活性的影响及形态观察使用不同浓度SS31（10nmol/L，100nmol/L，1μmol/L）预处理细胞2h后加入浓

西安医学院临床医学硕士专业学位论文29度为200μmol/L的H2O2，用MTT法检测SS31对细胞氧化损伤是否有保护作用以及SS31对细胞是否有毒性。如图2A所示，单纯SS31处理ARPE-19细胞后，细胞活性（86%±4.0）较空白对照组（89.3%±4.1）对比，无明显差异，而经过不同浓度的SS31预处理细胞2h后，与作用浓度为200μmol/L的H2O2组（67%±3.9）相比，可以看出随着SS31浓度的升高，细胞的活性逐渐升高，依次为（71.9%±5.4）、（76.4%±3.3）、（82.2%±3.4），在SS31浓度为1μmol/L时，细胞活性较损伤组升高最为明显。因此，选择1μmol/L的SS31作为最佳保护浓度。各浓度保护组与H2O2组相比，差异具有统计学意义，P＜0.05。在后续实验中，均用这一浓度处理细胞。如图2B所示，随着SS31浓度的升高，细胞凋亡数目逐渐减少，形态趋于正常，其中，浓度为1μmol/L的SS31组细胞形态改变较损伤组最为明显。图2A不同浓度SS31对H2O2浓度为200μmol/L作用下的细胞的活性的影响注:检测不同浓度SS31预处理H2O2浓度为200μmol/L作用下的ARPE-19细胞的活性,结果以均值±标准差来表示。*表示与H2O2组比较,P＜0.05,差异具有统计学意义,n=9。

【参考文献】：
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本文编号：2951458