犬细小病毒病毒样颗粒包被量子点复合物的构建和性质分析
发布时间：2021-01-15 23:49
犬细小病毒（canine parvovirus,CPV）病毒样颗粒（virus-like particles,VLPs）是一种由犬细小病毒衣壳结构蛋白组成的具有类似天然病毒粒子空间结构的多聚体颗粒。犬细小病毒病毒样颗粒因不含有病毒基因遗传物质,而具有较好的免疫原性和安全性,能有效刺激机体产生良好的免疫反应。近年来,利用CPV VP2蛋白获得的病毒样颗粒,不仅保持了VLP的免疫原性,而且能够模拟CPV自然病毒粒子感染途径,通过VP2蛋白与细胞表面特异受体的结合,实现CPV VLPs的靶向定位或载运。量子点（quantum dot,QD）以其独有的荧光特性在生物成像方面具有良好的应用潜力,但量子点生物相容性差、无靶向结合能力、对细胞和机体具有明显的生物毒性,严重限制了量子点在生物学方面的广泛应用。本研究主要是利用PCR的方法将犬细小病毒的衣壳蛋白VP2基因扩增链接到pSMK载体质粒上,借鉴大肠杆菌表达系统可溶性表达多种病毒样颗粒的研究方法,得到可溶性的VP2蛋白,然后利用病毒衣壳蛋白自组装成病毒样颗粒特性。在体外环境下,以VLP为原料将MPA修饰后的量子点MPA-QDs包裹进入病毒样颗粒内...
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：44 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
英文缩略词表
第一章 文献综述
1 CPV VLPs的生物学特性
2 CPV病毒样颗粒的获得
2.1 真核表达系统获得CPV VLPs
2.2 原核细胞表达系统获得CPV VLPs
3 CPV VLPs的生物应用
3.1 CPV VLPs在病毒学基础研究中的应用
3.2 CPV VLPs在疫苗研究中的应用
3.3 CPV VLPs作为生物载体的应用
4 量子点（QD）及其生物学应用研究
5 展望
第二章 犬细小病毒病毒样颗粒包被量子点方法建立
1 材料
1.1 表达菌
1.2 主要试剂及仪器
2 方法
2.1 CPV-VP2蛋白在大肠杆菌中的异源表达及纯化
2.2 体外组装获得CPV VLP
2.3 油溶性CdSe/ZnS量子（QD）表面改性
2.4 CPV VLP包被修饰后的量子点（MPA-QD）
2.5 免疫印迹实验（western bloting）
2.6 表面电荷及粒子直径检测
3 结果
3.1 CPV VLP体外表达及组装
3.2 甲基丙烯酸修饰后的量子点（MPA-QD）
3.3 CPV VLPs包被MPA-QD复合物的构建结果
4 讨论
第三章 CPV VLP-QDs复合物性质研究
1 材料
1.1 细胞
1.2 主要试剂及仪器
2 方法
2.1 CPV VLP包被MPA-QD最佳比例
2.2 CPV VLP-QD复合物的稳定性分析
2.3 CPV VLP-QD复合物的细胞毒性
2.4 CPV VLP-QD复合物在细胞中的聚集情况
3 结果
3.1 CPV VLP包被MPA-QD最佳比例
3.2 CPV VLP-QD复合物的稳定性分析
3.3 MTT毒性试验
3.4 免疫荧光观察CPV VLP-QD在细胞内的聚集分析
4 讨论
4.1 CPV VLP包被MPA-QD最佳比例
4.2 MTT毒性试验
4.3 免疫荧光观察CPV VLP-QD在细胞内的聚集分析
结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]量子点的聚合物表面修饰及其应用[J]. 来守军,关晓琳. 化学进展. 2011(05)
[2]犬细小病毒VP2基因真核表达质粒的构建与瞬时表达[J]. 简子健,马素贞,陈胜男,翟少华,赵森. 新疆农业科学. 2011(04)
[3]高效液相色谱法测定MPA含量及有关物质[J]. 蒋顺进,黄炜乾,凌波. 医学信息(中旬刊). 2010(07)
[4]MAA修饰ZnO量子点及其发光特性[J]. 庄稼,刘猛,刘汉斌. 中国科学:化学. 2010(04)
[5]口蹄疫基因工程疫苗研究进展[J]. 杨生海,殷宏,张杰,刘永生,陈豪泰,马丽娜,马艳平,丁耀忠. 江西农业学报. 2009(04)
[6]CdE（E=S,Se,Te）量子点的合成、修饰、表征及应用[J]. 何春萍,傅昕,黄可龙. 怀化学院学报(自然科学). 2007(02)
硕士论文
[1]量子点的性质及其分析化学应用研究[D]. 文立群.华中师范大学 2008
本文编号：2979737
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：44 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
英文缩略词表
第一章 文献综述
1 CPV VLPs的生物学特性
2 CPV病毒样颗粒的获得
2.1 真核表达系统获得CPV VLPs
2.2 原核细胞表达系统获得CPV VLPs
3 CPV VLPs的生物应用
3.1 CPV VLPs在病毒学基础研究中的应用
3.2 CPV VLPs在疫苗研究中的应用
3.3 CPV VLPs作为生物载体的应用
4 量子点（QD）及其生物学应用研究
5 展望
第二章 犬细小病毒病毒样颗粒包被量子点方法建立
1 材料
1.1 表达菌
1.2 主要试剂及仪器
2 方法
2.1 CPV-VP2蛋白在大肠杆菌中的异源表达及纯化
2.2 体外组装获得CPV VLP
2.3 油溶性CdSe/ZnS量子（QD）表面改性
2.4 CPV VLP包被修饰后的量子点（MPA-QD）
2.5 免疫印迹实验（western bloting）
2.6 表面电荷及粒子直径检测
3 结果
3.1 CPV VLP体外表达及组装
3.2 甲基丙烯酸修饰后的量子点（MPA-QD）
3.3 CPV VLPs包被MPA-QD复合物的构建结果
4 讨论
第三章 CPV VLP-QDs复合物性质研究
1 材料
1.1 细胞
1.2 主要试剂及仪器
2 方法
2.1 CPV VLP包被MPA-QD最佳比例
2.2 CPV VLP-QD复合物的稳定性分析
2.3 CPV VLP-QD复合物的细胞毒性
2.4 CPV VLP-QD复合物在细胞中的聚集情况
3 结果
3.1 CPV VLP包被MPA-QD最佳比例
3.2 CPV VLP-QD复合物的稳定性分析
3.3 MTT毒性试验
3.4 免疫荧光观察CPV VLP-QD在细胞内的聚集分析
4 讨论
4.1 CPV VLP包被MPA-QD最佳比例
4.2 MTT毒性试验
4.3 免疫荧光观察CPV VLP-QD在细胞内的聚集分析
结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]量子点的聚合物表面修饰及其应用[J]. 来守军,关晓琳. 化学进展. 2011(05)
[2]犬细小病毒VP2基因真核表达质粒的构建与瞬时表达[J]. 简子健,马素贞,陈胜男,翟少华,赵森. 新疆农业科学. 2011(04)
[3]高效液相色谱法测定MPA含量及有关物质[J]. 蒋顺进,黄炜乾,凌波. 医学信息(中旬刊). 2010(07)
[4]MAA修饰ZnO量子点及其发光特性[J]. 庄稼,刘猛,刘汉斌. 中国科学:化学. 2010(04)
[5]口蹄疫基因工程疫苗研究进展[J]. 杨生海,殷宏,张杰,刘永生,陈豪泰,马丽娜,马艳平,丁耀忠. 江西农业学报. 2009(04)
[6]CdE（E=S,Se,Te）量子点的合成、修饰、表征及应用[J]. 何春萍,傅昕,黄可龙. 怀化学院学报(自然科学). 2007(02)
硕士论文
[1]量子点的性质及其分析化学应用研究[D]. 文立群.华中师范大学 2008
本文编号：2979737
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/benkebiyelunwen/2979737.html
