IFN-α亚型在流感病毒感染中的差异性表达
发布时间：2021-01-17 09:48
流感病毒感染后上皮细胞和免疫细胞通过模式识别受体识别流感病毒,通过释放包括IFN-α和IFN-β在内的I型干扰素和各种细胞因子,促进固有免疫系统的抗病毒反应。但是过度释放的细胞因子可能诱导产生细胞因子风暴,造成急性肺损伤。流感病毒感染所诱发的急性肺损伤被认为与其诱导的Ⅰ型干扰素（尤其IFN-α）关系密切。IFN-α有多种亚型,人有13种,小鼠有14种。已有研究证明不同病毒感染诱导产生的IFN-α亚型不相同,目前流感病毒感染中IFN-α亚型的表达差异尚不明确。为了探索IFN-α亚型在流感病毒感染中的差异性表达,我们首先通过生物信息学分析筛选IFN-α亚型;随后使用体外流感病毒感染人和小鼠上皮细胞、单核/巨噬细胞及流感病毒感染小鼠模型,检测流感病毒感染后IFN-α亚型及相关转录因子m RNA的表达水平;最后克隆表达IFN-α21亚型重组蛋白,初步探究其生物学活性。本研究为流感病毒感染引发免疫损伤的防治提供了实验基础。
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
干扰素调节因子的激活和I型干扰素正反馈调节作用[53]
吉林大学硕士学位论文82.2.4IFN-α亚型的启动子分析使用GeneCopoeia（https://www.genecopoeia.com）获取各IFN-α亚型启动子序列，并在启动子上找寻IRF、NF-κB转录因子结合位点序列，在启动子相应位置进行标记。2.3结果2.3.1IFN-α亚型氨基酸序列及碱基序列比对由于人和小鼠的IFN-α都有多种亚型，我们分别对人和小鼠IFN-α亚型的氨基酸序列和编码基因碱基序列比对。2.3.1.1人IFN-α亚型氨基酸序列及编码基因碱基序列比对我们对人IFN-α亚型之间的氨基酸序列和编码基因碱基序列分别进行了比对，结果如下：（1）人IFN-α不同亚型之间的氨基酸序列比对为了确定IFN-α亚型之间的氨基酸序列是否存在差异，我们使用DNAMAN对人IFN-α各亚型氨基酸序列进行比对，发现各IFN-α亚型的氨基酸同源性高达88.46%，其中已经应用于临床的IFNA2型比较特殊，在第68位缺少一个甘氨酸（Glycine,G），其他各亚型的氨基酸序列无法完全区分（如图2.1所示）。这说明在蛋白质水平上区分不同IFN-α亚型的表达情况是不可能的。图2.1人IFN-α不同亚型氨基酸序列的比对结果Fig2.1ComparisonresultsofaminoacidsequencesofdifferentsubtypesofhumanIFN-α（2）人IFN-α不同亚型编码基因的碱基序列比对由于人IFN-α不同亚型氨基酸序列无法完全区分，因此，我们分析了IFN-α各亚型编码基因的碱基序列。结果发现：人IFN-α各亚型的编码基因碱基序列的同源性更高，为93.45%。
第二章IFN-α亚型生物信息学分析9但当对位置进行比对时，我们发现各亚型间的序列差异还是很大的（如图2.2所示），连续超过20bp完全相同的序列只在第490-520的位置，其余序列均无法找到连续20bp以上完全相同的序列。这提示在mRNA水平上通过设计特定序列引物是可以区分不同IFN-α亚型的，这为后续以qRT-PCR分析不同IFN-α亚型的表达水平奠定了基矗图2.2人IFN-α不同亚型编码基因碱基序列的比对结果Fig2.2ComparisonresultsofbasesequencesofdifferentsubtypesofhumanIFN-α2.3.1.2小鼠IFN-α亚型氨基酸序列及编码基因碱基序列比对我们对小鼠IFN-α亚型之间的氨基酸序列和编码基因碱基序列分别比对，结果如下：（1）小鼠IFN-α亚型氨基酸序列比对同上，我们对小鼠的IFN-α亚型的氨基酸序列也进行了比对分析，结果发现：小鼠IFN-α亚型氨基酸序列同源性为89.49%，其中Ifna4尤为特殊，在第19位氨基酸较其他亚型多一个丙氨酸（Alanine，A），第125至129位缺少五个氨基酸。其他各亚型的氨基酸序列无法完全区分（图2.3）。这提示在蛋白质水平上是无法区分小鼠IFN-α亚型的。
本文编号：2982639
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
干扰素调节因子的激活和I型干扰素正反馈调节作用[53]
吉林大学硕士学位论文82.2.4IFN-α亚型的启动子分析使用GeneCopoeia（https://www.genecopoeia.com）获取各IFN-α亚型启动子序列，并在启动子上找寻IRF、NF-κB转录因子结合位点序列，在启动子相应位置进行标记。2.3结果2.3.1IFN-α亚型氨基酸序列及碱基序列比对由于人和小鼠的IFN-α都有多种亚型，我们分别对人和小鼠IFN-α亚型的氨基酸序列和编码基因碱基序列比对。2.3.1.1人IFN-α亚型氨基酸序列及编码基因碱基序列比对我们对人IFN-α亚型之间的氨基酸序列和编码基因碱基序列分别进行了比对，结果如下：（1）人IFN-α不同亚型之间的氨基酸序列比对为了确定IFN-α亚型之间的氨基酸序列是否存在差异，我们使用DNAMAN对人IFN-α各亚型氨基酸序列进行比对，发现各IFN-α亚型的氨基酸同源性高达88.46%，其中已经应用于临床的IFNA2型比较特殊，在第68位缺少一个甘氨酸（Glycine,G），其他各亚型的氨基酸序列无法完全区分（如图2.1所示）。这说明在蛋白质水平上区分不同IFN-α亚型的表达情况是不可能的。图2.1人IFN-α不同亚型氨基酸序列的比对结果Fig2.1ComparisonresultsofaminoacidsequencesofdifferentsubtypesofhumanIFN-α（2）人IFN-α不同亚型编码基因的碱基序列比对由于人IFN-α不同亚型氨基酸序列无法完全区分，因此，我们分析了IFN-α各亚型编码基因的碱基序列。结果发现：人IFN-α各亚型的编码基因碱基序列的同源性更高，为93.45%。
第二章IFN-α亚型生物信息学分析9但当对位置进行比对时，我们发现各亚型间的序列差异还是很大的（如图2.2所示），连续超过20bp完全相同的序列只在第490-520的位置，其余序列均无法找到连续20bp以上完全相同的序列。这提示在mRNA水平上通过设计特定序列引物是可以区分不同IFN-α亚型的，这为后续以qRT-PCR分析不同IFN-α亚型的表达水平奠定了基矗图2.2人IFN-α不同亚型编码基因碱基序列的比对结果Fig2.2ComparisonresultsofbasesequencesofdifferentsubtypesofhumanIFN-α2.3.1.2小鼠IFN-α亚型氨基酸序列及编码基因碱基序列比对我们对小鼠IFN-α亚型之间的氨基酸序列和编码基因碱基序列分别比对，结果如下：（1）小鼠IFN-α亚型氨基酸序列比对同上，我们对小鼠的IFN-α亚型的氨基酸序列也进行了比对分析，结果发现：小鼠IFN-α亚型氨基酸序列同源性为89.49%，其中Ifna4尤为特殊，在第19位氨基酸较其他亚型多一个丙氨酸（Alanine，A），第125至129位缺少五个氨基酸。其他各亚型的氨基酸序列无法完全区分（图2.3）。这提示在蛋白质水平上是无法区分小鼠IFN-α亚型的。
本文编号：2982639
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/benkebiyelunwen/2982639.html
