miRNA-34c和miRNA-449b通过靶向AXL基因调控睾丸支持细胞增殖和凋亡
发布时间：2021-01-22 01:53
精子发生是一个复杂的生物学过程,这一过程需要生精细胞和睾丸体细胞的协同作用。睾丸生精小管中具有多种细胞,支持细胞作为对睾丸具有重要功能的一种体细胞,可形成血-睾屏障,分泌多种分泌因子,还可以为生殖细胞提供生物学上的支持,如果支持细胞的基因表达调控发生异常,可能会导致精子发生的障碍,从而导致雄性不育。研究表明,microRNAs（miRNAs）对支持细胞的增殖、分泌和凋亡具有一定调控作用。本实验室前期转录组数据分析,发现miRNA-34c和miRNA-449b在初生公牛和成年公牛的睾丸组织中差异表达,我们推测miRNA-34c和miRNA-449b可能在公牛的精子发生过程中具有调控作用,但作用及其机制尚不清楚。本研究构建miRNA-34c和miRNA-449b的干扰和过表达载体,采用EdU和qRT-PCR检测鉴定了miRNA-34c和miRNA-449b对支持细胞增殖和分泌功能的影响,并通过流式细胞术和TUNEL,检测了miRNA-34c和miRNA-449b对牛支持细胞细胞凋亡的影响。结果表明:miRNA-34c和miRNA-449b对睾丸支持细胞均有调控作用,其中:当miRNA-34...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
2 EdU法检测牛支持细胞增殖
图1.2.1A中结果显示,与对照组相比,当转染miRNA-34c mimics时,miRNA-34c的表达水平极显著的提高（p<0.0001）,当转染miRNA-34c inhibitor后,miRNA-34c的表达水平显著的降低（p<0.01）。从图1.2.1B、C和D中可以看出,与对照组相比,转染miRNA-34c mimics后,细胞增殖基因PCNA、BCL2和BCL2L2的表达水平降低（p<0.01）,而转染miRNA-34c inhibitor后,细胞增殖基因PCNA、BCL2和BCL2L2的表达水平升高（p<0.01）。从图1.2.1E中可以看出,miRNA-34c过表达时,支持细胞分泌因子GDNF、BMP4和CXCL12的表达水平降低（p<0.05）,而miRNA-34c被抑制时,结果与miRNA-34c mimics结果相反,其中,细胞分泌因子GDNF和CXCL12的表达水平均显著升高（p<0.01）。从这些实验结果我们可以看出,miRNA-34c抑制了初生牛睾丸支持细胞的增殖基因和分泌因子的标的水平.通过F和G图,我们可以看出,miRNA-34c过表达时,雄激素结合受体ABP的表达含量降低,当miRNA-34c被抑制时,ABP含量升高。图1.2.1 Mi RNA-34c对增殖相关基因和分泌因子的表达量的调控
图1.2.1 Mi RNA-34c对增殖相关基因和分泌因子的表达量的调控向六孔板中加入等量的支持细胞,约1.3×105个细胞,并将细胞铺布均匀,待细胞约长至约70%至80%时,进行转染,36h时用EdU方法检测细胞增殖情况。图1.2.2通过EdU检测细胞增殖的的结果可以看出,miRNA-34c过表达后增殖的阳性细胞数减少,而miRNA-34c被抑制后增殖的阳性细胞信号增加。EdU的实验结果和增殖基因的表达水平说明miRNA-34c抑制了初生牛睾丸支持细胞的增殖。
【参考文献】：
期刊论文
[1]microRNA-132对肾间质成纤维细胞分泌细胞外基质的调控作用[J]. 朱慧萍,苏震,周宏伟,章慧娣,黄朝兴. 温州医学院学报. 2013(07)
博士论文
[1]MicroRNA-143对脂肪细胞分泌功能和胆固醇流出的影响及机制研究[D]. 邢钰.中南大学 2012
本文编号：2992312
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
2 EdU法检测牛支持细胞增殖
图1.2.1A中结果显示,与对照组相比,当转染miRNA-34c mimics时,miRNA-34c的表达水平极显著的提高（p<0.0001）,当转染miRNA-34c inhibitor后,miRNA-34c的表达水平显著的降低（p<0.01）。从图1.2.1B、C和D中可以看出,与对照组相比,转染miRNA-34c mimics后,细胞增殖基因PCNA、BCL2和BCL2L2的表达水平降低（p<0.01）,而转染miRNA-34c inhibitor后,细胞增殖基因PCNA、BCL2和BCL2L2的表达水平升高（p<0.01）。从图1.2.1E中可以看出,miRNA-34c过表达时,支持细胞分泌因子GDNF、BMP4和CXCL12的表达水平降低（p<0.05）,而miRNA-34c被抑制时,结果与miRNA-34c mimics结果相反,其中,细胞分泌因子GDNF和CXCL12的表达水平均显著升高（p<0.01）。从这些实验结果我们可以看出,miRNA-34c抑制了初生牛睾丸支持细胞的增殖基因和分泌因子的标的水平.通过F和G图,我们可以看出,miRNA-34c过表达时,雄激素结合受体ABP的表达含量降低,当miRNA-34c被抑制时,ABP含量升高。图1.2.1 Mi RNA-34c对增殖相关基因和分泌因子的表达量的调控
图1.2.1 Mi RNA-34c对增殖相关基因和分泌因子的表达量的调控向六孔板中加入等量的支持细胞,约1.3×105个细胞,并将细胞铺布均匀,待细胞约长至约70%至80%时,进行转染,36h时用EdU方法检测细胞增殖情况。图1.2.2通过EdU检测细胞增殖的的结果可以看出,miRNA-34c过表达后增殖的阳性细胞数减少,而miRNA-34c被抑制后增殖的阳性细胞信号增加。EdU的实验结果和增殖基因的表达水平说明miRNA-34c抑制了初生牛睾丸支持细胞的增殖。
【参考文献】：
期刊论文
[1]microRNA-132对肾间质成纤维细胞分泌细胞外基质的调控作用[J]. 朱慧萍,苏震,周宏伟,章慧娣,黄朝兴. 温州医学院学报. 2013(07)
博士论文
[1]MicroRNA-143对脂肪细胞分泌功能和胆固醇流出的影响及机制研究[D]. 邢钰.中南大学 2012
本文编号：2992312
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