小鼠巨噬细胞中DNMT1在VSV复制过程中作用的研究
发布时间：2021-01-22 02:30
水疱性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus,VSV）与狂犬病毒都属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）,且该病毒为水疱病毒属（Vesiculvirus）的原型。部分家畜如猪、牛、马在感染了水疱性口炎病毒后,其临床表现症状与口蹄疫和猪水疱疹极为相似,均有舌、唇、乳头等部位出现水疱和溃烂的症状,因此该病在兽医临床诊断上也极易出现误诊。并且该病为人兽共患性传染病,人类对此病毒易感,直接接触与气溶胶都是该病的传播方式,其临床表现为头疼、发热、恶心、无力等类似流感样的症状。目前对水疱性口炎还没有有效且可靠的治疗方法,因此对该病的研究具有重要的公共卫生学意义。由水疱性口炎病毒感染引起的水疱性口炎虽然对畜群的致死率不高,但是对畜群个体的生长发育造成的影响严重,对养殖业所造成的经济损失严重。该病在各个国家都有发生,并且被包括美国在内的多个国家列为必须上报的重点动物疫病,我国在2012-2020年国家中长期动物疫病防止规划中将水疱性口炎列为13种重点防范的动物外来疫病之一。DNA甲基化是目前研究的最为成熟的一种表观遗传修饰,在调控基因表达,维持染色体构象等方面起着至关重要...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
VSV对细胞内D
第二篇实验内容第一章DNMT1影响VSV的感染和复制16达量最高，然而实时荧光定量PCR检测结果发现，在细胞接种VSV后2、4、8h后，细胞内Dnmt1基因转录水平明显呈下降趋势。如图1.1。AB图1.1VSV对细胞内DNMT1基因表达的影响图1.1A.以MOI=1对RAW264.7细胞接种VSV，WesternBlot检测细胞内6和12h后DNMT1蛋白表达量；B.RT-qPCR检测细胞在接毒后2、4、8h后，细胞内Dnmt1的转录水平变化。1.3.2RAW264.7细胞中Dnmt1基因沉默应用慢病毒包装技术，对RAW264.7细胞内Dnmt1基因进行沉默处理，实时荧光定量PCR检测细胞内Dnmt1的转录水平对比正常细胞下降了近80%；同时WesternBlot检测细胞内DNMT1蛋白的表达量远低于正常细胞。如图1.2。AB图1.2RAW264.7细胞中Dnmt1基因沉默结果图1.2A.RT-qPCR检测RAW细胞与构建的细胞系RAW-△DNMT1中Dnmt1基因的转录水平；B.WesternBlot检测RAW细胞与RAW-△DNMT1细胞系内DNMT1蛋白表达量。*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001。
第二篇实验内容第一章DNMT1影响VSV的感染和复制18E图1.3基因和蛋白水平阻断DNMT1对VSV在细胞内复制增殖的影响图1.3A.RT-qPCR检测检测Thioguanine处理RAW264.7细胞后，以MOI=1接种VSV，细胞内病毒P基因表达水平；B.TCID50实验检测Thioguanine处理RAW264.7细胞，以MOI=1接种VSV后，细胞上清液中VSV的滴度；C.以MOI=1向RAW和RAW-△DNMT1细胞中接种VSV后，RT-qPCR检测细胞内病毒P基因的表达水平；D.TCID50检测RAW与RAW-△DNMT1细胞上清液中VSV的滴度；E.WseternBlot检测RAW和RAW-△DNMT1细胞中病毒G蛋白的含量。*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001。1.4讨论病毒在感染细胞的过程中可先后调控多种表观遗传因子的表达，从而达到可对细胞持续感染的目的[100-101]。而本实验中，在RAW264.7细胞感染VSV后，细胞内的DNMT1的含量在前12h内呈现出明显的升高现象，而感染24h时细胞内DNMT1的含量相比12h时显著降低，这可能是因为细胞的活力受到了病毒的破坏所导致，有待进一步研究。同样实时荧光定量PCR检测结果中，细胞在接毒8h内，Dnmt1基因的表达量则成下降趋势。也就是说VSV感染细胞后Dnmt1基因的表达确实受到了病毒的调控，这个结果与之前相关文献报导的结果一致。作为重要的表观遗传因子，Dnmt1基因的表达受到VSV的影响，同样在药物学失活DNMT1蛋白实验中，硫鸟嘌呤作为DNMT1的抑制剂，不仅可以阻断DNMT1的功能，同时还可以降解DNMT1。在硫鸟嘌呤处理细胞后，VSV在细胞内的复制增殖水平受到了显著的抑制而明显低于正常细胞组，这说明DNMT1蛋白的失活显著影响了VSV的复制增殖。而应用慢病毒包装技术对细
【参考文献】：
期刊论文
[1]DNA甲基化基因DNMT1的研究进展[J]. 黄滔,周兴路,毛曦轲,苏天宇,陈晨晨,吴志浩. 现代肿瘤医学. 2019(14)
[2]Ⅲ型干扰素抵抗寨卡病毒感染导致不良妊娠的机制[J]. 王晶晶,曹阳青,陈金铃. 中国人兽共患病学报. 2019(02)
[3]猪水疱性口炎的分析诊断和防治措施[J]. 张晓凤. 饲料博览. 2018(08)
[4]猪水疱口炎病毒感染临床症状与防治建议[J]. 马守菊. 中国畜禽种业. 2018(07)
[5]DNMT3b基因在骨髓瘤RPMI 8226细胞株中的表达及其生物学意义[J]. 王晓宁,姚建娜,王晓娟,孙春红,郭彩利,陈颖,贺鹏程,张梅. 中国实验血液学杂志. 2017(05)
[6]猪水疱性口炎的诊断与治疗效果评价[J]. 袁江华. 中国畜牧兽医文摘. 2017(03)
[7]猪水疱性口炎的诊断与治疗[J]. 周宏斌. 江西农业. 2017(05)
[8]猪常见疾病病理诊断与防控[J]. 高丰. 兽医导刊. 2016(07)
[9]水疱性口炎研究进展[J]. 孙洪正,徐自忠,周晓黎,董俊,花群义,高洪,范晴,江海天. 动物医学进展. 2007(10)
[10]水疱性口炎研究进展[J]. 郑增忍,王海霞,龚振华,张彦明. 中国兽医杂志. 2005(07)
硕士论文
[1]轻度认知障碍候选基因的DNA甲基化研究[D]. 刘桂利.宁波大学 2017
本文编号：2992370
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
VSV对细胞内D
第二篇实验内容第一章DNMT1影响VSV的感染和复制16达量最高，然而实时荧光定量PCR检测结果发现，在细胞接种VSV后2、4、8h后，细胞内Dnmt1基因转录水平明显呈下降趋势。如图1.1。AB图1.1VSV对细胞内DNMT1基因表达的影响图1.1A.以MOI=1对RAW264.7细胞接种VSV，WesternBlot检测细胞内6和12h后DNMT1蛋白表达量；B.RT-qPCR检测细胞在接毒后2、4、8h后，细胞内Dnmt1的转录水平变化。1.3.2RAW264.7细胞中Dnmt1基因沉默应用慢病毒包装技术，对RAW264.7细胞内Dnmt1基因进行沉默处理，实时荧光定量PCR检测细胞内Dnmt1的转录水平对比正常细胞下降了近80%；同时WesternBlot检测细胞内DNMT1蛋白的表达量远低于正常细胞。如图1.2。AB图1.2RAW264.7细胞中Dnmt1基因沉默结果图1.2A.RT-qPCR检测RAW细胞与构建的细胞系RAW-△DNMT1中Dnmt1基因的转录水平；B.WesternBlot检测RAW细胞与RAW-△DNMT1细胞系内DNMT1蛋白表达量。*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001。
第二篇实验内容第一章DNMT1影响VSV的感染和复制18E图1.3基因和蛋白水平阻断DNMT1对VSV在细胞内复制增殖的影响图1.3A.RT-qPCR检测检测Thioguanine处理RAW264.7细胞后，以MOI=1接种VSV，细胞内病毒P基因表达水平；B.TCID50实验检测Thioguanine处理RAW264.7细胞，以MOI=1接种VSV后，细胞上清液中VSV的滴度；C.以MOI=1向RAW和RAW-△DNMT1细胞中接种VSV后，RT-qPCR检测细胞内病毒P基因的表达水平；D.TCID50检测RAW与RAW-△DNMT1细胞上清液中VSV的滴度；E.WseternBlot检测RAW和RAW-△DNMT1细胞中病毒G蛋白的含量。*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001。1.4讨论病毒在感染细胞的过程中可先后调控多种表观遗传因子的表达，从而达到可对细胞持续感染的目的[100-101]。而本实验中，在RAW264.7细胞感染VSV后，细胞内的DNMT1的含量在前12h内呈现出明显的升高现象，而感染24h时细胞内DNMT1的含量相比12h时显著降低，这可能是因为细胞的活力受到了病毒的破坏所导致，有待进一步研究。同样实时荧光定量PCR检测结果中，细胞在接毒8h内，Dnmt1基因的表达量则成下降趋势。也就是说VSV感染细胞后Dnmt1基因的表达确实受到了病毒的调控，这个结果与之前相关文献报导的结果一致。作为重要的表观遗传因子，Dnmt1基因的表达受到VSV的影响，同样在药物学失活DNMT1蛋白实验中，硫鸟嘌呤作为DNMT1的抑制剂，不仅可以阻断DNMT1的功能，同时还可以降解DNMT1。在硫鸟嘌呤处理细胞后，VSV在细胞内的复制增殖水平受到了显著的抑制而明显低于正常细胞组，这说明DNMT1蛋白的失活显著影响了VSV的复制增殖。而应用慢病毒包装技术对细
【参考文献】：
期刊论文
[1]DNA甲基化基因DNMT1的研究进展[J]. 黄滔,周兴路,毛曦轲,苏天宇,陈晨晨,吴志浩. 现代肿瘤医学. 2019(14)
[2]Ⅲ型干扰素抵抗寨卡病毒感染导致不良妊娠的机制[J]. 王晶晶,曹阳青,陈金铃. 中国人兽共患病学报. 2019(02)
[3]猪水疱性口炎的分析诊断和防治措施[J]. 张晓凤. 饲料博览. 2018(08)
[4]猪水疱口炎病毒感染临床症状与防治建议[J]. 马守菊. 中国畜禽种业. 2018(07)
[5]DNMT3b基因在骨髓瘤RPMI 8226细胞株中的表达及其生物学意义[J]. 王晓宁,姚建娜,王晓娟,孙春红,郭彩利,陈颖,贺鹏程,张梅. 中国实验血液学杂志. 2017(05)
[6]猪水疱性口炎的诊断与治疗效果评价[J]. 袁江华. 中国畜牧兽医文摘. 2017(03)
[7]猪水疱性口炎的诊断与治疗[J]. 周宏斌. 江西农业. 2017(05)
[8]猪常见疾病病理诊断与防控[J]. 高丰. 兽医导刊. 2016(07)
[9]水疱性口炎研究进展[J]. 孙洪正,徐自忠,周晓黎,董俊,花群义,高洪,范晴,江海天. 动物医学进展. 2007(10)
[10]水疱性口炎研究进展[J]. 郑增忍,王海霞,龚振华,张彦明. 中国兽医杂志. 2005(07)
硕士论文
[1]轻度认知障碍候选基因的DNA甲基化研究[D]. 刘桂利.宁波大学 2017
本文编号：2992370
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