裂殖壶菌CRISPR/Cas9体系的建立及应用于脂肪酸代谢研究
发布时间：2021-01-31 09:22
二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）是一种极为重要的n-3多不饱和脂肪酸,具有抗癌、抗炎、预防心血管疾病的作用,并能促进婴幼儿神经系统和视觉系统的发育和成熟。而裂殖壶菌（Schizochytrium limacinum）是属于破囊壶菌科的一类海洋真菌,体内积累了大量的DHA,是目前已知的DHA含量最高的海洋真菌,因其具有的重要经济价值而备受人们关注。因此通过对裂殖壶菌DHA合成途径的研究,利用生物工程方法来最大限度提高裂殖壶菌DHA产量,具有极为重要的生物学意义和经济价值。CRISPR/Cas9是一种高效准确的新兴基因编辑技术,目前已应用该技术成功在多个物种实现基因编辑。本文旨在以裂殖壶菌为研究对象,通过构建相应的CRISPR/Cas9基因编辑系统,对裂殖壶菌中与脂肪酸合成相关的基因进行敲除,并替换为Zeocin抗性基因片段,初步探索CRISPR/Cas9基因编辑系统在海洋真菌裂殖壶菌中的应用,以及相关基因敲除后对脂肪酸产量的影响。据此,本实验的主要内容及研究结果如下:（1）为了确定本实验的选择标记基因,从而能够成功筛选出转化菌株,本实验选取了基因工程中常...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DHA结构图
图 1.2 EPA 结构图Fig 1.2 Schematic representation of EPA和脂肪酸的生理功能肪主要是植物油脂和动物油脂。其中动形式存在，而植物油脂中虽含有不饱和n-3 多不饱和脂肪酸的含量却微乎其微不饱和脂肪酸对于人体的健康、营养和]。丹麦的研究人员发现，格陵兰岛上居住于其他周边国家居民，主要原因是爱斯饱和脂肪酸[6]。这一发现引起人们对 n其中的 DHA 和 EPA 做了大量研究，发统和视觉系统的发育,防止心血管疾病等
9图 1.4 产脓链球菌 CRISPR/Cas9 干扰噬菌体或外源质粒入侵示意图[64]Fig1.4 Schematic of CRISPR/Cas9 mediated DNAdouble-strand breakCRISPR/Cas 系统大体上可以分为 3 大类型：Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型[65]。其中，Ⅰ型和Ⅲ型在介导外源 DNA 降解过程中需要多种 Cas 蛋白的参与，形成的切割复合体结构较为复杂，Ⅱ型系统组分则相对简单，只需要一个 Cas9 蛋白来切割DNA 双链即可。一个简易的Ⅱ型 CRISPR/Cas 系统必定要含有 gRNA 和 Cas9，Cas9蛋白具有改造crRNA和破坏双链DNA的双重功能，位于gRNA 5’端的20 bp
【参考文献】：
期刊论文
[1]CRISPR/Cas:新一代基因编辑技术[J]. 黄妤,王世春. 生命的化学. 2015(01)
[2]基于同源重组的裂殖壶菌遗传转化体系的构建及验证[J]. 庄小燕,陈胜兰,纪晓俊,徐娴,任路静. 微生物学报. 2015(04)
[3]CRISPR/Cas9介导的基因组定点编辑技术[J]. 方锐,畅飞,孙照霖,李宁,孟庆勇. 生物化学与生物物理进展. 2013(08)
[4]电转化法构建变形链球菌UA159 comD缺陷菌株[J]. 陈娇,周智,尹一兵,张雪梅,李锐,李月恒,王勤花,黄雅静. 中国微生态学杂志. 2011(04)
[5]用醋酸锂法转化巴氏毕赤酵母表达人核心蛋白聚糖[J]. 郝小夏. 山西医药杂志. 2010(05)
[6]真菌遗传转化系统研究进展[J]. 郑苗苗,张旭,侯琨,王占斌. 农业科技与装备. 2008(02)
[7]EPA、DHA对脂多糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响[J]. 耿文静,柳方娥,焦波,程艳娜. 山东大学学报(医学版). 2008(01)
[8]裂殖壶菌Schizochytrium sp.FJU-512细胞油脂的研究[J]. 张娟梅,江贤章,黄建忠. 福建师范大学学报(自然科学版). 2007(02)
[9]ECM830电穿孔仪在毕赤酵母电转化中的应用[J]. 王永兴,尉明皎,徐敬龙,金扩世,胡仲明,金宁一. 动物医学进展. 2006(S1)
[10]1株裂殖壶菌(Schizochytrium sp.的分离鉴定[J]. 周茂洪,周林,赵肖为,余林静,林娜. 微生物学通报. 2006(04)
本文编号：3010603
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DHA结构图
图 1.2 EPA 结构图Fig 1.2 Schematic representation of EPA和脂肪酸的生理功能肪主要是植物油脂和动物油脂。其中动形式存在，而植物油脂中虽含有不饱和n-3 多不饱和脂肪酸的含量却微乎其微不饱和脂肪酸对于人体的健康、营养和]。丹麦的研究人员发现，格陵兰岛上居住于其他周边国家居民，主要原因是爱斯饱和脂肪酸[6]。这一发现引起人们对 n其中的 DHA 和 EPA 做了大量研究，发统和视觉系统的发育,防止心血管疾病等
9图 1.4 产脓链球菌 CRISPR/Cas9 干扰噬菌体或外源质粒入侵示意图[64]Fig1.4 Schematic of CRISPR/Cas9 mediated DNAdouble-strand breakCRISPR/Cas 系统大体上可以分为 3 大类型：Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型[65]。其中，Ⅰ型和Ⅲ型在介导外源 DNA 降解过程中需要多种 Cas 蛋白的参与，形成的切割复合体结构较为复杂，Ⅱ型系统组分则相对简单，只需要一个 Cas9 蛋白来切割DNA 双链即可。一个简易的Ⅱ型 CRISPR/Cas 系统必定要含有 gRNA 和 Cas9，Cas9蛋白具有改造crRNA和破坏双链DNA的双重功能，位于gRNA 5’端的20 bp
【参考文献】：
期刊论文
[1]CRISPR/Cas:新一代基因编辑技术[J]. 黄妤,王世春. 生命的化学. 2015(01)
[2]基于同源重组的裂殖壶菌遗传转化体系的构建及验证[J]. 庄小燕,陈胜兰,纪晓俊,徐娴,任路静. 微生物学报. 2015(04)
[3]CRISPR/Cas9介导的基因组定点编辑技术[J]. 方锐,畅飞,孙照霖,李宁,孟庆勇. 生物化学与生物物理进展. 2013(08)
[4]电转化法构建变形链球菌UA159 comD缺陷菌株[J]. 陈娇,周智,尹一兵,张雪梅,李锐,李月恒,王勤花,黄雅静. 中国微生态学杂志. 2011(04)
[5]用醋酸锂法转化巴氏毕赤酵母表达人核心蛋白聚糖[J]. 郝小夏. 山西医药杂志. 2010(05)
[6]真菌遗传转化系统研究进展[J]. 郑苗苗,张旭,侯琨,王占斌. 农业科技与装备. 2008(02)
[7]EPA、DHA对脂多糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响[J]. 耿文静,柳方娥,焦波,程艳娜. 山东大学学报(医学版). 2008(01)
[8]裂殖壶菌Schizochytrium sp.FJU-512细胞油脂的研究[J]. 张娟梅,江贤章,黄建忠. 福建师范大学学报(自然科学版). 2007(02)
[9]ECM830电穿孔仪在毕赤酵母电转化中的应用[J]. 王永兴,尉明皎,徐敬龙,金扩世,胡仲明,金宁一. 动物医学进展. 2006(S1)
[10]1株裂殖壶菌(Schizochytrium sp.的分离鉴定[J]. 周茂洪,周林,赵肖为,余林静,林娜. 微生物学通报. 2006(04)
本文编号：3010603
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