MiR-30a调控间充质干细胞生长及免疫功能的机制研究

发布时间：2021-02-12 06:34

　　间充质干细胞（Mesenchymal stem cell, MSCs）是一类具有自我更新能力,低免疫原性,广泛的免疫调控能力和多向分化潜能的多功能干细胞。母胎界面是MSCs的一个重要来源,并且母胎界面相关功能的改变：如螺旋动脉重铸障碍,滋养层细胞浸润过浅,免疫平衡失调等都会影响妊娠的正常进行。因此,母胎界面处的MSCs对于正常的妊娠过程可能具有重要的调节功能。目前人们已经成功从来源于母胎界面的多种组织,如脐带组织、胎盘组织和蜕膜组织中成功分离培养出MSCs。MicroRNAs（miRNAs）是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的单链非编码小RNA,通过与其靶基因mRNA的非翻译区结合,在转录后水平调节基因的表达,进而参与调控多种生物过程。MiRNAs的差异表达或遗传改变都会影响其对靶基因的表达调控,涉及到许多疾病包括子痫前期的发病机制。前期我们通过miRNAs芯片技术发现,与正常孕产妇相比,miR-30a在子痫前期患者母胎界面的蜕膜中表达存在差异。脐带作为连接母体和胎儿的重要组织,在胎儿的生长发育阶段发挥关键作用。可是,迄今还不清楚,miR-30a在子痫前期患者和正常孕妇的脐带组... 

【文章来源】：南京大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词
前言
第一章 MiR-30a对脐带MSCs生长状况影响的分析
    1.1 引言
    1.2 实验材料
        1.2.1 实验对象
        1.2.2 主要试剂
        1.2.3 主要仪器设备
    1.3 实验方法
        1.3.1 脐带组织来源间充质干细胞的获取与分离培养
?2000转染MSCs高表达miR-30a">        1.3.2 Lipofectamine^?2000转染MSCs高表达miR-30a
        1.3.3 流式细胞术检测MSCs表面标志的表达
        1.3.4 Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡
        1.3.5 CCK-8法检测细胞活力
        1.3.6 细胞周期的检测
        1.3.7 实时荧光定量PCR分析相关因子mRNA表达水平
        1.3.8 Western blot检测相关蛋白的表达水平
        1.3.9 数据统计分析
    1.4 实验结果与分析
        1.4.1 成功获取脐带组织来源MSCs
        1.4.2 MiR-30a在子痫前期患者的脐带组织及MSCs中异常高表达
        1.4.3 高表达miR-30a对MSCs形态及表型没有影响
        1.4.4 高表达miR-30a对MSCs细胞凋亡与活力没有影响
        1.4.5 高表达miR-30a引起MSCs细胞周期的阻滞
        1.4.7 讨论
第二章 MiR-30a调控MSCs免疫调节功能的机制
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验对象
        2.2.2 主要试剂
        2.2.3 主要仪器设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 脐带MSCs的分离与培养
        2.3.2 MicroRNA片段与干扰片段的转染
        2.3.3 实时荧光定量PCR分析相关基因mRNA的表达水平
        2.3.4 Western blot检测相关蛋白的表达
        2.3.5 ELISA检测MSCs培养上清中IL-6的表达
        2.3.6 Dual Luciferase Reporter Gene Assay检测miR-30a与TAB3的3'UTR的靶向关系
        2.3.7 数据统计分析
    2.4 实验结果与分析
        2.4.1 高表达miR-30a抑制IL-1β诱导的IL-6、COX2和IL-8的表达
        2.4.2 高表达miR-30a减弱MSCs对巨噬细胞的免疫抑制作用
        2.4.3 高表达miR-30a抑制IL-1β介导的NF-κB和JNK通路的活化
        2.4.4 高表达miR-30a抑制TAB3的表达
        2.4.5 TAB3是miR-30a调控MSCs免疫抑制功能的关键靶点
        2.4.6 讨论
结论
参考文献
附录
硕士期间科研成果
致谢
感谢以下基金的资助



本文编号：3030407