拟南芥转录因子CBF1及NAC基因的克隆与原核表达
发布时间：2021-03-13 13:19
转录因子（transcription factor, TF）是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质,又称反式作用因子。通过识别与结合真核基因启动子中的顺式作用元件,使目的基因的表达得到精准的调控。拟南芥在植物结构功能、进化遗传及生态学领域的研究被广泛使用,是大家广为熟悉的植物遗传学研究中的模式生物。拟南芥模式植物的优点是其功能基因较容易获得。在植物功能基因的研究中,常常需要实现目的基因以特定的强度、在特定的时间和空间表达的效果,而这正是因为转录因子在这过程中所起的作用。CBF1和NAC是两种重要的激活植物抗逆基因表达的转录因子。拟南芥CBF1转录因子能调控一组抗干旱和抗低温基因的表达,从而有效提高植物体对干旱和低温的抗性能力；拟南芥NAC主要参与调控植物低温、干旱、激素、高盐、生长发育及病原胁迫反应等相关过程。本研究以拟南芥（Arabidopsis thaliana）叶片为研究材料,通过基因克隆和表达的方法初步研究了植物转录因子CBFl和NAC的功能,为后续植物抗逆性能改良打好基础。实验首先用Trizol试剂法提取总RNA,经RT-PCR反转录,之后扩增CBF1基因和NAC基...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：41 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 引言
1.1 拟南芥简介
1.2 转录因子的介绍
1.2.1 转录因子CBF1的一般介绍
1.2.2 转录因子NAC的介绍
1.3 转录因子CBF及NAC的研究进展
1.3.1 转录因子CBF的研究进展
1.3.2 转录因子NAC的研究进展
1.4 转录因子的常用分离方法
第2章 研究意义
第3章 材料与方法
3.1 材料
3.1.1 菌株、植物材料和载体
3.1.2 主要试剂
3.1.3 缓冲液配制
3.2 试验方法
3.2.1 拟南芥总RNA的提取
3.2.2 反转录
3.2.3 引物的设计
3.2.5 DNA片段的回收
3.2.6 PCR片段与T载体的连接
3.2.7 转化
3.2.8 鉴定转化子
3.2.9 质粒DNA的提取
3.2.10 双酶切鉴定
3.2.11 CBF1基因的原核表达
第4章 结果与分析
4.1 总RNA的提取
4.2 RT-PCR扩增CBF1、NAC基因
4.3 扩增片段与T载体连接
4.3.1 扩增CBF1基因片段与T载体连接
4.3.2 扩增NAC基因片段与T载体连接
4.4 转录因子基因序列分析
4.4.1 CBF1基因序列分析
4.4.2 NAC基因序列分析
4.5 CBF1基因的原核表达
第5章 讨论
第6章 结论与展望
6.1 结论
6.2 展望
致谢
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]拟南芥abi5基因的分子克隆及其在原核细胞中的表达和纯化[J]. 马燕林,马建忠,王永刚. 植物生理学报. 2014(02)
[2]植物NAC转录因子家族研究概况[J]. 彭辉,于兴旺,成慧颖,张桦,石庆华,李建贵,麻浩. 植物学报. 2010(02)
[3]草坪植物RNA提取方法的比较研究[J]. 望飞勇,何勇,许本波,徐锋,田志宏. 长江大学学报(自科版)农学卷. 2007(01)
[4]与拟南芥抗寒性相关的CBF3和AtGolS3基因克隆及其表达载体的构建[J]. 钟克亚,叶妙水,胡新文,符少萍,郭建春. 植物生理学通讯. 2006(04)
[5]植物转录因子的超表达及其在分子育种中的应用[J]. 张秋平,杨宇红,谢丙炎,刘志敏. 分子植物育种. 2006(03)
[6]转录因子与植物抗逆性研究进展[J]. 刘欣,李云. 中国农学通报. 2006(04)
[7]DREB转录因子研究进展[J]. 王平荣,邓晓建,高晓玲,陈静,万佳,姜华,徐正君. 遗传. 2006(03)
[8]一个新的编码大豆DREB转录因子基因的克隆及鉴定[J]. 王巧燕,陈明,邱志刚,程宪国,徐兆师,李连城,马有志. 西南农业学报. 2005(05)
[9]草坪草狗牙根中抗逆基因BeDREB的克隆及功能鉴定[J]. 谢永丽,王自章,刘强,张淑平. 中国生物化学与分子生物学报. 2005(04)
[10]转录因子CBF4诱导型启动子的克隆及功能分析[J]. 霍秀文,米福贵,云锦凤,魏建华. 分子植物育种. 2005(03)
博士论文
[1]甘菊NAC基因的功能研究及对露地菊花的遗传转化[D]. 董凤丽.东北林业大学 2014
[2]真菌蛋白激发子诱导棉花抗病增产的作用机制及其基因对棉花遗传转化的研究[D]. 张志刚.湖南农业大学 2007
[3]拟南芥抗旱候选基因的SNP及其与抗旱性状的相关性分析以及ATHK1基因的功能研究[D]. 郝岗平.南京农业大学 2004
硕士论文
[1]拟南芥abi5基因的分子克隆及其在原核细胞中的表达[D]. 曹如星.兰州理工大学 2012
[2]小麦叶片水分胁迫下cDNA-AFLP差异表达分析[D]. 李剑峰.新疆农业大学 2010
[3]利用DREB转录因子改良小麦耐盐性的研究[D]. 梁欣欣.中国农业科学院 2004
本文编号：3080288
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：41 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 引言
1.1 拟南芥简介
1.2 转录因子的介绍
1.2.1 转录因子CBF1的一般介绍
1.2.2 转录因子NAC的介绍
1.3 转录因子CBF及NAC的研究进展
1.3.1 转录因子CBF的研究进展
1.3.2 转录因子NAC的研究进展
1.4 转录因子的常用分离方法
第2章 研究意义
第3章 材料与方法
3.1 材料
3.1.1 菌株、植物材料和载体
3.1.2 主要试剂
3.1.3 缓冲液配制
3.2 试验方法
3.2.1 拟南芥总RNA的提取
3.2.2 反转录
3.2.3 引物的设计
3.2.5 DNA片段的回收
3.2.6 PCR片段与T载体的连接
3.2.7 转化
3.2.8 鉴定转化子
3.2.9 质粒DNA的提取
3.2.10 双酶切鉴定
3.2.11 CBF1基因的原核表达
第4章 结果与分析
4.1 总RNA的提取
4.2 RT-PCR扩增CBF1、NAC基因
4.3 扩增片段与T载体连接
4.3.1 扩增CBF1基因片段与T载体连接
4.3.2 扩增NAC基因片段与T载体连接
4.4 转录因子基因序列分析
4.4.1 CBF1基因序列分析
4.4.2 NAC基因序列分析
4.5 CBF1基因的原核表达
第5章 讨论
第6章 结论与展望
6.1 结论
6.2 展望
致谢
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]拟南芥abi5基因的分子克隆及其在原核细胞中的表达和纯化[J]. 马燕林,马建忠,王永刚. 植物生理学报. 2014(02)
[2]植物NAC转录因子家族研究概况[J]. 彭辉,于兴旺,成慧颖,张桦,石庆华,李建贵,麻浩. 植物学报. 2010(02)
[3]草坪植物RNA提取方法的比较研究[J]. 望飞勇,何勇,许本波,徐锋,田志宏. 长江大学学报(自科版)农学卷. 2007(01)
[4]与拟南芥抗寒性相关的CBF3和AtGolS3基因克隆及其表达载体的构建[J]. 钟克亚,叶妙水,胡新文,符少萍,郭建春. 植物生理学通讯. 2006(04)
[5]植物转录因子的超表达及其在分子育种中的应用[J]. 张秋平,杨宇红,谢丙炎,刘志敏. 分子植物育种. 2006(03)
[6]转录因子与植物抗逆性研究进展[J]. 刘欣,李云. 中国农学通报. 2006(04)
[7]DREB转录因子研究进展[J]. 王平荣,邓晓建,高晓玲,陈静,万佳,姜华,徐正君. 遗传. 2006(03)
[8]一个新的编码大豆DREB转录因子基因的克隆及鉴定[J]. 王巧燕,陈明,邱志刚,程宪国,徐兆师,李连城,马有志. 西南农业学报. 2005(05)
[9]草坪草狗牙根中抗逆基因BeDREB的克隆及功能鉴定[J]. 谢永丽,王自章,刘强,张淑平. 中国生物化学与分子生物学报. 2005(04)
[10]转录因子CBF4诱导型启动子的克隆及功能分析[J]. 霍秀文,米福贵,云锦凤,魏建华. 分子植物育种. 2005(03)
博士论文
[1]甘菊NAC基因的功能研究及对露地菊花的遗传转化[D]. 董凤丽.东北林业大学 2014
[2]真菌蛋白激发子诱导棉花抗病增产的作用机制及其基因对棉花遗传转化的研究[D]. 张志刚.湖南农业大学 2007
[3]拟南芥抗旱候选基因的SNP及其与抗旱性状的相关性分析以及ATHK1基因的功能研究[D]. 郝岗平.南京农业大学 2004
硕士论文
[1]拟南芥abi5基因的分子克隆及其在原核细胞中的表达[D]. 曹如星.兰州理工大学 2012
[2]小麦叶片水分胁迫下cDNA-AFLP差异表达分析[D]. 李剑峰.新疆农业大学 2010
[3]利用DREB转录因子改良小麦耐盐性的研究[D]. 梁欣欣.中国农业科学院 2004
本文编号：3080288
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