基于抗原表位的禽网状内皮组织增殖病病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制

发布时间：2021-03-26 08:25

　　禽网状内皮组织增殖病（Reticuloendotheliosis,RE）是由反转录病毒科的网状内皮组织增殖病病毒（REV）引起的一系列病理性综合征,其主要感染宿主为火鸡、鸡、鸭、鹅以及其他禽类。REV引起的病理症状主要包括急性网状细胞瘤、矮小综合征以及慢性淋巴组织瘤等。由于REV作用的靶细胞主要为淋巴细胞和网状细胞,能够损害机体的免疫功能,降低机体的免疫应答能力,尤其是幼禽感染REV时,会发生明显的免疫抑制,继发其它感染。目前,对RE尚无有效的防控手段,只能通过对REV抗原或抗体检测,淘汰病鸡,净化鸡群。为了准确了解REV感染情况,及早淘汰患病鸡,阻止REV传播,减少REV对家禽养殖造成的损失,具有操作简单快速、敏感性高等优点的酶联免疫吸附试验是最佳检测手段,但由于REV的高变异性,现有的试剂盒难以准确地检测并且价格昂贵,无法适于大规模的临床使用。因此,建立操作简单快速、敏感性高、特异性强并且成本低适用于大规模临床使用的REV抗体ELISA检测试剂盒具有重要意义。REV-Gp90蛋白位于病毒囊膜的表面,含有线性表位和构象表位,能够激发宿主产生中和抗体,是病毒的免疫显性蛋白。抗原表位是抗... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

REVHis-env蛋白SDS-PAGE分析

基于抗原表位的禽网状内皮组织增殖病病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制22图2纯化REVHis-env蛋白SDS-PAGE分析Fig2SDS-PAGEanalysispurificationofthepurifiedREVHis-envproteinM:Proteinladder;1:未纯化上清;2:未纯化蛋白;3:纯化蛋白3.1.3REVHis-env蛋白的WesternBlot检测分析分别使用抗His标签单克隆抗体、REV抗体阳性血清为一抗，对目的蛋白进行WesternBlot分析；结果显示，两种抗体均能与目的蛋白发生反应，REVHis-env蛋白表达成功且具有良好的反应原性（图3）。图3WesternBlot分析REVHis-env蛋白Fig3AnalysisofREVHis-envproteinbyWesternblotindifferentantibodiesM:Proteinladder;1:REVHis-env蛋白3.1.4REVHis-env蛋白联合佐剂免疫动物实验结果用制备的REV多克隆抗体作为一抗，分别使用REVHis-env蛋白和REV接毒细胞蛋白作为抗原，进行Westernblot分析；结果显示，两种抗原蛋白均能与抗体发生反应，制备的REV多克隆抗体具有良好的反应原性(图4)。

山东农业大学硕士专业学位论文25图5REV串联表位蛋白表达的SDS-PAGE分析图Fig5SDS-PAGEanalysisoffusiongeneexpressionproductofREVtandemepitopesproteinM:Proteinladder;1:表达上清;2:表达包涵体3.2.4REV表位串联蛋白的纯化与复性大量诱导目的蛋白表达后，进行蛋白纯化及复性，SDS-PAGE检测蛋白是否能够稳定表达，以及蛋白的纯化与复性效果；结果显示，目的蛋白能够稳定表达，且目的蛋白纯化效果较好，蛋白复性后浓度有所降低（图6）。图6REV表位串联蛋白纯化复性后的SDS-PAGE分析Fig6SDS-PAGEanalysispurificationofthepurifiedandrenaturedREVtandemepitopesproteinM:Proteinladder;1:总蛋白;2:纯化蛋白;3:复性蛋白3.2.5复性REV表位串联蛋白浓度测定使用BCA蛋白浓度测定法测定复性蛋白的浓度，并绘制标准曲线，通过标准曲线计算得出复性表位串联蛋白浓度为400μg/mL。

【参考文献】：
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本文编号：3101301