小麦转录抑制因子TaASP1基因的克隆和表达分析
发布时间：2021-05-16 19:04
植物的胚胎后发育取决于分生组织的活性,因此分生组织中细胞的命运对植物的发育和株型至关重要。转录抑制因子通过与其他蛋白的互作,从而对基因的表达起相应的抑制作来调节基因的功能。目前已报道的植物转录因子包括拟南芥TOPLESS （TPL）,玉米RAMOSA1 ENHANCER LOCUS2（REL2）和水稻ABERRANT SPIKELET AND PANICLEI（ASP1）均属于转录抑制因子TUP1家族。这类转录因子能调控发育及生理反应的多个方面,如穗、枝梗和小穗等的发育,同时对叶腋分生组织的维持起重要作用。本研究以普通小麦作为研究材料,通过电子克隆及PCR克隆等方法,分离得到小麦TaASP1基因序列,并对该基因的表达模式及功能进行了初步的研究,为深入解析该基因在小麦形态发育和环境应答等方面的作用奠定基础。本研究的主要结果如下：1. 以水稻OsASP1基因（GenBank登录号：AK111830）的cDNA序列为模板,Blast检索NCBI中小麦EST数据库,选取同源性较高的7对EST序列进行拼接,获得包含完整开放阅读框（ORF）的3591bp序列；并以该序列为模板设计4对相互重叠特异引...
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
1 文献综述
1.1 分生组织的发育
1.2 Groucho(GRO)/TUP1转录因子
1.3 TOPLESS亚家族
1.3.1 拟南芥TOPLESS(TPL)
1.3.2 玉米RAMOSA1 ENHANCER LOCUS2(REL2)
1.3.3 水稻ABERRANT SPIKELETAND PANICLE1(ASP1)
1.4 立题依据
2 材料和方法
2.1 实验材料和试剂
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌株
2.1.3 质粒载体
2.1.4 试剂
2.1.5 培养基
2.1.6 电泳缓冲液
2.1.7 PCR引物
2.2 实验方法
2.2.1 小麦组织的收集
2.2.2 小麦总RNA的提取
2.2.3 小麦cDNA第一链的合成
2.2.4 基因组DNA的提取
2.2.5 小麦TaASP1的全长cDNA的扩增
2.2.6 PCR产物末端加“A”
2.2.7 PCR产物的回收纯化
2.2.8 胶回收产物与TA克隆载体的连接反应
2.2.9 与大肠杆菌的热激转化
2.2.10 阳性检测及测序
2.2.11 小麦TaASP1基因组DNA的扩增
2.2.12 生物信息学分析
2.2.13 染色体定位分析
2.2.14 荧光定量
2.2.15 亚细胞定位
2.2.16 TaASP1启动子功能的验证
3 结果与分析
3.1 小麦TaASP1的全长cDNA的PCR扩增
3.2 基因组DNA的克隆和序列分析
3.3 基因的序列分析
3.4 小麦TaASP1基因的生物信息学分析
3.4.1 小麦TaASP1蛋白的理化性质分析
3.4.2 小麦TaASP1蛋白的二级结构预测
3.4.3 小麦TaASP1基因编码蛋白的疏亲水性分析
3.4.4 小麦TaASP1基因的同源性分析
3.5 小麦TaASP1基因的染色体定位分析
3.6 小麦TaASP1基因的荧光定量PCR分析
3.7 小麦TaASP1基因的亚细胞定位
3.7.1 载体构建的过程
3.7.2 基因枪转化洋葱表皮细胞
3.8 小麦TaASP1启动子功能的验证
3.8.1 载体构建的过程
3.8.2 转基因烟草的鉴定
4 讨论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于表达序列标签数据库（dbEST）的电子克隆技术[J]. 于浩,刘娣,杨秀芹. 黑龙江畜牧兽医. 2003(04)
[2]EST技术及其在基因全长cDNA克隆上的应用策略[J]. 何志颖,姚玉成. 国外医学.遗传学分册. 2002(02)
[3]春小麦生长发育过程的初步研究(续一)[J]. 陆正铎,刘新正,常守吉,陈双喜,赵志明. 内蒙古农业科技. 1979(01)
博士论文
[1]一个水稻花发育突变体的基因克隆及功能分析[D]. 刘坚.浙江大学 2013
[2]水稻T-DNA插入突变体库的构建及控制水稻株高和花粉育性基因OsLIS-L1的分离与鉴定[D]. 郜新强.华中农业大学 2011
[3]植物中2个DREB类转录抑制子的功能研究[D]. 董春娟.清华大学 2010
[4]水稻发育和农艺性状基因在不同时空差异表达的分子剖析[D]. 郭龙彪.浙江大学 2005
[5]普通小麦Myb和Dof转录因子家族基因的克隆和表达研究[D]. 陈荣敏.中国农业大学 2004
硕士论文
[1]小麦Ramosa基因与穗分枝现象的相关性研究[D]. 韩撵法.西北农林科技大学 2008
本文编号：3190233
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
1 文献综述
1.1 分生组织的发育
1.2 Groucho(GRO)/TUP1转录因子
1.3 TOPLESS亚家族
1.3.1 拟南芥TOPLESS(TPL)
1.3.2 玉米RAMOSA1 ENHANCER LOCUS2(REL2)
1.3.3 水稻ABERRANT SPIKELETAND PANICLE1(ASP1)
1.4 立题依据
2 材料和方法
2.1 实验材料和试剂
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌株
2.1.3 质粒载体
2.1.4 试剂
2.1.5 培养基
2.1.6 电泳缓冲液
2.1.7 PCR引物
2.2 实验方法
2.2.1 小麦组织的收集
2.2.2 小麦总RNA的提取
2.2.3 小麦cDNA第一链的合成
2.2.4 基因组DNA的提取
2.2.5 小麦TaASP1的全长cDNA的扩增
2.2.6 PCR产物末端加“A”
2.2.7 PCR产物的回收纯化
2.2.8 胶回收产物与TA克隆载体的连接反应
2.2.9 与大肠杆菌的热激转化
2.2.10 阳性检测及测序
2.2.11 小麦TaASP1基因组DNA的扩增
2.2.12 生物信息学分析
2.2.13 染色体定位分析
2.2.14 荧光定量
2.2.15 亚细胞定位
2.2.16 TaASP1启动子功能的验证
3 结果与分析
3.1 小麦TaASP1的全长cDNA的PCR扩增
3.2 基因组DNA的克隆和序列分析
3.3 基因的序列分析
3.4 小麦TaASP1基因的生物信息学分析
3.4.1 小麦TaASP1蛋白的理化性质分析
3.4.2 小麦TaASP1蛋白的二级结构预测
3.4.3 小麦TaASP1基因编码蛋白的疏亲水性分析
3.4.4 小麦TaASP1基因的同源性分析
3.5 小麦TaASP1基因的染色体定位分析
3.6 小麦TaASP1基因的荧光定量PCR分析
3.7 小麦TaASP1基因的亚细胞定位
3.7.1 载体构建的过程
3.7.2 基因枪转化洋葱表皮细胞
3.8 小麦TaASP1启动子功能的验证
3.8.1 载体构建的过程
3.8.2 转基因烟草的鉴定
4 讨论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于表达序列标签数据库（dbEST）的电子克隆技术[J]. 于浩,刘娣,杨秀芹. 黑龙江畜牧兽医. 2003(04)
[2]EST技术及其在基因全长cDNA克隆上的应用策略[J]. 何志颖,姚玉成. 国外医学.遗传学分册. 2002(02)
[3]春小麦生长发育过程的初步研究(续一)[J]. 陆正铎,刘新正,常守吉,陈双喜,赵志明. 内蒙古农业科技. 1979(01)
博士论文
[1]一个水稻花发育突变体的基因克隆及功能分析[D]. 刘坚.浙江大学 2013
[2]水稻T-DNA插入突变体库的构建及控制水稻株高和花粉育性基因OsLIS-L1的分离与鉴定[D]. 郜新强.华中农业大学 2011
[3]植物中2个DREB类转录抑制子的功能研究[D]. 董春娟.清华大学 2010
[4]水稻发育和农艺性状基因在不同时空差异表达的分子剖析[D]. 郭龙彪.浙江大学 2005
[5]普通小麦Myb和Dof转录因子家族基因的克隆和表达研究[D]. 陈荣敏.中国农业大学 2004
硕士论文
[1]小麦Ramosa基因与穗分枝现象的相关性研究[D]. 韩撵法.西北农林科技大学 2008
本文编号：3190233
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