小鼠肝脏内源性UFM化修饰的蛋白质组学分析

发布时间：2021-06-23 13:18

　　[目的]UFM修饰是一种蛋白质翻译后修饰,在细胞发育和维持组织动态平衡都起着至关重要的作用。课题组通过对C57小鼠的肝脏组织进行规模化的蛋白质组学分析,结合自制的UFM1抗体,通过高分辨率质谱鉴定UFM修饰蛋白和修饰位点。这次规模化鉴定内源性UFM修饰蛋白的工作为人们研究UFM修饰的功能和机制提供更多实验依据。[方法]1.根据UFM1的特性设计UFM1抗体。2.通过IP（免疫沉淀）和WB（免疫印迹）验证自制UFM1抗体的有效性和特异性。3.对C57小鼠的肝脏组织进行质谱前的处理,包括裂解,酶解和IP（免疫沉淀）。4.对数据进行蛋白质组学分析。5.验证UFM修饰蛋白。[结果]1.自制UFM1抗体较商业化UFM1抗体相比其特异性和有效性都存在优势。2.通过高分辨率质谱总共鉴定到178个UFM修饰蛋白的203个修饰位点。3.数据库中鉴定到RPL26这一个已知的UFM修饰蛋白,修饰位点K132和K134与报道吻合。4.生物信息学分析表明UFM修饰不仅仅定位于内质网中,在线粒体内也有大量富集,可能与细胞代谢中的氧化还原过程存在着很密切的联系。5.本课题组根据UFM修饰蛋白和位点的规律提出“Exx... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

1自制UFM1抗体设计思路

第4章实验结果图4.1.2自制UFM1抗体的有效性验证注：自制UFM1兔多抗（3641和3642）显示出比商业化UFM1兔单抗更高的亲和力，具有更好的检测效果。然后，为了验证自制UFM1抗体的特异性，本课题组使用siRNA小分子在293细胞中敲低人源UFSP2基因，同时使用与人源UFM1序列无同源性的siRNA作为阴性对照，将细胞裂解后分别使用自制的UFM1兔多抗（3641和3642）和商业化UFM1兔单抗进行免疫印迹检测UFM化蛋白，本课题组发现自制UFM1兔多抗（3641和3642）跟商业化UFM1兔单抗相比，自制UFM1兔多抗（3641和3642）的特异性稍稍好于商业化UFM1兔单抗，后面课题组会继续完善自制UFM1抗体，争取让自制UFM1兔多抗（3641和3642）具有更好的特异性（图4.1.3和4.1.4）。19

南华大学硕士学位论文图4.1.3商业化UFM1效果图图4.1.3自制UFM1抗体的特异性验证注：自制UFM1兔多抗（3641和3642）的特异性稍好于商业化UFM1兔单抗。20

【参考文献】：
期刊论文
[1]UFMylation:A Unique & Fashionable Modification for Life[J]. Ying Wei,Xingzhi Xu.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2016(03)
[2]Mallory-Denk Bodies in chronic hepatitis[J]. Metin Basaranoglu,Nesrin Turhan,Abdullah Sonsuz,Gkcen Basaranoglu.  World Journal of Gastroenterology. 2011(17)
[3]Mallory-Denk body pathogenesis revisited[J]. Samuel W French,Fawzia Bardag-Gorce,Barbara A French,Joan Oliva.  World Journal of Hepatology. 2010(08)



本文编号：3245010