无损DNA提取技术以及分子鉴定在甲螨中的应用研究

发布时间：2021-07-06 04:24

　　甲螨是一类重要的土壤动物,体型微小,一般具有较厚的体壁。本研究分别对无损DNA提取技术以及分子鉴定在甲螨中的应用进行了探究。在无损DNA提取部分,本研究针对甲螨这一特定类群,探讨了一种无形态特征损伤的DNA提取技术。通过结合试剂盒DNA提取法,并适当改进实验条件,设计出一套行之有效的DNA提取流程。然后将该方法应用于大翼甲螨、角翼甲螨、尖棱甲螨的DNA提取实验中,PCR扩增并测序之后将所得序列与GenBank数据库进行Blast比对验证了甲螨DNA序列的正确性。随后对提取DNA之后的甲螨标本进行形态学观察,发现其外部形态结构保存完好,主要的分类学特征清晰可见,此标本可以作为凭证标本长期保存。因此本研究提供的DNA提取技术既可以提取出足够的DNA又能够保留凭证标本,这将会有效促进甲螨分子分类学的相关研究。在分子鉴定技术在甲螨中的应用研究方面,本研究选取了目前常用的28S基因序列和COI基因序列作为分子标记。利用28S基因序列分析了大翼甲螨、角翼甲螨、尖棱甲螨、礼服甲螨不同科之间的序列差异情况,以Ischyropsalis strandi（GenBank登录号为:KP224374.1）为外... 

【文章来源】：河北大学河北省

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

提取DNA的甲螨标本与未提取DNA的甲螨标本的形态对比图

第二章无损DNA提取技术在甲螨中的应用25图2-2经过DNA提取之后的甲螨标本形态结构图Figure2-2:ThephotographsofmorphologicalcharactersafterbeingDNAextractedinoribatidmites注：A：孔区；B：感器；C：左足Ⅰ。比例尺=50μm。Note:A:Porosearea;B:Bothridialsetae;C:LegⅠ,left.Scalebar=50μm.2.4.3讨论与展望经过形态学鉴定，A组样本里的甲螨标本是大翼甲螨科的显大翼甲螨中华亚种Galumnaobviussinensis，这种甲螨的个体相对较大（体长725-775μm，宽525-550μm），使用此无损DNA提取方法，可以只用一头标本就能提取出足够的DNA。B组样本里的甲螨标本是角翼甲螨，这种甲螨的个体相对较小，使用此无损DNA提取方法，需要使用两头标本才能提取出足够的DNA。C组样本里的甲螨标本是尖棱甲螨，这种甲螨的个体最小，使用此无损DNA提取方法，需要使用三头标本才能提取出足够的DNA。由此可以看出，虽然大翼甲螨可以只用一头标本就能够提取出可用于后续实验的足够的DNA，但是角翼甲螨和尖棱甲螨需要使用两头或三头标本。经过对比实验发现，几丁质酶的浓度与水浴消化的时间，会对甲螨的DNA提取效率产生影响，当适当提高几丁质酶的浓度或延长甲螨的水浴消化时间，会提高甲螨DNA的提取效率。但是，为了在DNA提取之后还能保持甲螨标本的完整性，在用几丁质酶进行标本的初步消化时，还是应当控制好几丁质酶的使用浓度与标本的水浴消化时间，如果几丁质酶的浓度


本文编号：3267518