艾克曼菌Prx蛋白结构与功能研究
发布时间：2021-07-06 13:17
艾克曼菌（Akkermansia muciniphila）是一种严格厌氧的革兰氏阴性细菌。近年来,大量证据表明艾克曼菌可作为一种有益细菌,在维持人体胃肠道稳态中发挥重要作用。过氧化物酶（Peroxiredoxins,Prxs）是生物体内常见的硫醇特异性抗氧化蛋白,广泛存在于多种生物体中,具有特异性强、分布广、表达量高等特点。目前国内外对动物、植物、酵母、原虫等中Prxs结构与功能的报道较为广泛,关于厌氧细菌Prxs相关研究较少。根据序列比对结果推测艾克曼菌的Prx（AmPrx）为典型的2-Cys Prxs,此外,在序列上发现AmPrx比已知结构的典型2-Cys Prxs在α4螺旋和β6折叠片之间多出一段插入。本课题为探究AmPrx的结构与功能,通过大肠杆菌异源表达获得AmPrx重组蛋白,使用坐滴法进行晶体生长。利用X射线衍射技术解析了AmPrx晶体结构,晶体的衍射分辨率为2.6?。同时在体外测定了AmPrx的过氧化物酶活性,并研究了AmPrx与艾克曼菌硫氧还蛋白（Akkermansia muciniphila thioredoxin,AmTrx）之间的相互作用。结构解析结果表明AmPr...
【文章来源】：安徽大学安徽省 211工程院校
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
过氧化物酶(Prx)的反应机理（RheeSGetal.2017）
安徽大学硕士学位论文7图1.2AmPrx与其他典型2-CysPrxs的序列比对Figure1.2SequencealignmentofAmPrxagainstothertypical2-CysPrxsfromdifferentorganisms.AmPrx的二级结构显示在序列的上方。CP和CR用黑色箭头表示。比对的序列分别为:AkkermansiaglycaniphilaPrx,Haloferulasp.BvORR071Prx,RubritaleamarinaPrx,BacteroidesgraminisolvensPrx,MarinifilumflexuosumPrx,HomosapiensPrx1,HomosapiensPrx2,HomosapiensPrx3,HomosapiensPrx4,MusMusculusPrx4,ArabidopsisthalianaPrxA,andHookwormAncylostomaPrx1.
第二章实验材料与方法20○8测各孔在560nm处的吸光值，○6-○8步骤重复3次，计算同样编号三孔的平均值。○9绘制标准曲线（如图2.1）。图2.1H2O2浓度标准曲线Figure2.1StandardcurveofH2O2concentration2.2.8AmPrx过氧化物酶活性测定根据酶活测定的原理，本实验用H2O2定量分析试剂盒测定AmPrx蛋白酶活性。实验开始前，先配置反应体系所用的缓冲液（20mMTris-HCl,pH7.5,300mMNaCl,5%glycerol），再向反应体系中加入0.5mMDTT、6μMAmTrx蛋白,以及4μMAmPrx及其突变体蛋白(AmPrxC49S,AmPrxS80E,AmPrx△120-132)。然后25℃恒温孵育10min后，按照试剂盒说明书配制检测液，配好后，按照每孔200μl的体积加入96孔酶标板，孵育10min后向体系中加入90μMH2O2，然后分别在反应1、2、3、4、5min时取10μl的反应液加入96孔板中的H2O2定量分析试剂盒检测液中（此过程重复3次），混匀20min后立即放入酶标仪选择波长560nm并读数，根据读数计算H2O2的消耗量。每个实验组重复3次，并计算标准差。2.2.9圆二色光谱实验圆二色光谱（CD谱）可以检测溶液状态下蛋白的二级结构，是目前测定蛋白质二
【参考文献】：
期刊论文
[1]Gut microbiota role in irritable bowel syndrome: New therapeutic strategies[J]. Eleonora Distrutti,Lorenzo Monaldi,Patrizia Ricci,Stefano Fiorucci. World Journal of Gastroenterology. 2016(07)
本文编号：3268314
【文章来源】：安徽大学安徽省 211工程院校
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
过氧化物酶(Prx)的反应机理（RheeSGetal.2017）
安徽大学硕士学位论文7图1.2AmPrx与其他典型2-CysPrxs的序列比对Figure1.2SequencealignmentofAmPrxagainstothertypical2-CysPrxsfromdifferentorganisms.AmPrx的二级结构显示在序列的上方。CP和CR用黑色箭头表示。比对的序列分别为:AkkermansiaglycaniphilaPrx,Haloferulasp.BvORR071Prx,RubritaleamarinaPrx,BacteroidesgraminisolvensPrx,MarinifilumflexuosumPrx,HomosapiensPrx1,HomosapiensPrx2,HomosapiensPrx3,HomosapiensPrx4,MusMusculusPrx4,ArabidopsisthalianaPrxA,andHookwormAncylostomaPrx1.
第二章实验材料与方法20○8测各孔在560nm处的吸光值，○6-○8步骤重复3次，计算同样编号三孔的平均值。○9绘制标准曲线（如图2.1）。图2.1H2O2浓度标准曲线Figure2.1StandardcurveofH2O2concentration2.2.8AmPrx过氧化物酶活性测定根据酶活测定的原理，本实验用H2O2定量分析试剂盒测定AmPrx蛋白酶活性。实验开始前，先配置反应体系所用的缓冲液（20mMTris-HCl,pH7.5,300mMNaCl,5%glycerol），再向反应体系中加入0.5mMDTT、6μMAmTrx蛋白,以及4μMAmPrx及其突变体蛋白(AmPrxC49S,AmPrxS80E,AmPrx△120-132)。然后25℃恒温孵育10min后，按照试剂盒说明书配制检测液，配好后，按照每孔200μl的体积加入96孔酶标板，孵育10min后向体系中加入90μMH2O2，然后分别在反应1、2、3、4、5min时取10μl的反应液加入96孔板中的H2O2定量分析试剂盒检测液中（此过程重复3次），混匀20min后立即放入酶标仪选择波长560nm并读数，根据读数计算H2O2的消耗量。每个实验组重复3次，并计算标准差。2.2.9圆二色光谱实验圆二色光谱（CD谱）可以检测溶液状态下蛋白的二级结构，是目前测定蛋白质二
【参考文献】：
期刊论文
[1]Gut microbiota role in irritable bowel syndrome: New therapeutic strategies[J]. Eleonora Distrutti,Lorenzo Monaldi,Patrizia Ricci,Stefano Fiorucci. World Journal of Gastroenterology. 2016(07)
本文编号：3268314
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