犬细小病毒基因工程抗体的研究
发布时间：2021-08-18 17:04
犬细小病毒病是由犬细小病毒（Canine parvovirus,CPV）感染引起,严重危害犬类健康的传染病,具有发病率高、传染性强、死亡率高等特点。目前犬细小病毒病没有特效药物,目前采用的单克隆抗体在CPV感染早期有良好的治疗效果,但单克隆抗体为鼠源,具有较高的免疫原性,不能连续注射。本研究通过对已有单克隆抗体进行犬源化改造,制备适合犬用的免疫原性低的抗CPV抗体药物。首先对已有抗CPV的杂交瘤细胞株4H8进行鉴定,4H8抗体亚型为IgG2b,亲和力常数6个Ka平均值为1.02×10111 L/mol,只与CPV VLPs反应。经RACE-PCR提取4H8抗体可变区序列,用NCBI IgBLAST分析。将4H8抗体可变区序列与在ENA网站上查到的鼠源抗体恒定区序列组装,分别构建真核表达载体pcDNA3.1（+）-L和pcDNA3.1（+）-H,共转染HEK-293、HEK-293F细胞进行表达。采用间接ELISA检测鼠源CPV基因工程抗体（CA）的表达量,CA在HEK-293F细胞中的表达量为5.97 mg/L;血凝抑制、中和试验检测其生物活...
【文章来源】：长春工业大学吉林省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CPV单克隆抗体亲和力测定
第3章结果21表3-1单克隆抗体特异性测定项目CPVVLPsCAVCCVCDV4H81.07N/AN/AN/A阳性对照1.137N/AN/AN/A阴性对照N/AN/AN/AN/AN/A：不适用，无结合反应。3.2鼠源CPV基因工程抗体的制备3.2.1鼠源CPV基因工程抗体可变区序列的获得提取4H8总RNA，反转录得到cDNA后，经RACE-PCR扩增获得抗体重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）的DNA片段，结果见图3.2。由图3.2可知，VH产物大小约800bp，VL产物大小约750bp，将两条特异条带切胶回收与载体连接送去测序。M，DL5000DNAmaker；1，VH；2，VL图3.2抗体可变区RACE-PCR3.2.2鼠源抗体可变区序列分区在NCBI网站上，用IgBLAST分析测序结果，与鼠源IgG比对，结果如图3.3所示。提取的两条序列中均有4个FR区和3个CDR区，证明成功提取出4H8抗体可变区序列。
抗体可变区序列分区
【参考文献】：
期刊论文
[1]抗犬细小病毒VP2蛋白单链抗体的制备与中和活性研究[J]. 李彤彤,宋彩玲,杨凯越,王文静,陈慧宇,刘明. 中国生物工程杂志. 2020(04)
[2]犬细小病毒研究进展[J]. 周宏专,苏霞,徐福洲,杨兵. 动物医学进展. 2019(12)
[3]双特异性抗体结构与作用机制研究进展[J]. 吕明,王军志,沈倍奋. 中国新药杂志. 2019(21)
[4]人源抗体制备及临床应用研究进展[J]. 陈秀秀,吴成林,周丽君. 中国生物工程杂志. 2019(10)
[5]江苏省扬泰地区犬细小病毒分子流行病学调查[J]. 王海燕,谢静,王涛,刘静,管远红,张斌,徐亚亚,曹明凤,崔乐遥,刘宗平. 中国动物检疫. 2019(10)
[6]双特异抗体的研究进展[J]. 叶金统,孟颂东,朱晓东. 生物工程学报. 2020(01)
[7]双特异性抗体药物在肿瘤治疗领域的研究进展[J]. 岳雅丽,尹骏,高向东,姚文兵. 中国药科大学学报. 2019(03)
[8]犬细小病毒国内外流行病学研究进展[J]. 孙明洁,董国英,张雪竹,胡桂学. 中国兽医学报. 2019(05)
[9]犬细小病毒通过促进ROS产生/线粒体损伤诱导宿主细胞的凋亡[J]. 王岩,张建楼,赵轶男,王晓敏,王猛,李笑然,仲飞. 河北农业大学学报. 2019(03)
[10]贵阳地区犬细小病毒NS1基因的克隆及序列分析[J]. 李世静,龙丹丹,嵇辛勤,黄梦秋,陈佳琪,廖政,王小兵. 黑龙江畜牧兽医. 2019(03)
博士论文
[1]利用烟草和豌豆瞬时表达抗aFGF单链抗体[D]. 王秀峰.东北师范大学 2015
硕士论文
[1]犬β干扰素的表达及其抗细小病毒复制的研究[D]. 黄梦秋.贵州大学 2019
[2]广西地区犬细小病毒的分子流行病学调查研究[D]. 黄华旭.广西大学 2018
[3]抗猫细小病毒基因工程嵌合抗体研究[D]. 薛雨佳.中国农业科学院 2018
[4]犬细小病毒VP2蛋白免疫血清疗效研究[D]. 龙丹丹.贵州大学 2018
[5]10株犬猫细小病毒的分离鉴定及NS1和VP2基因遗传变异分析[D]. 田彤彤.仲恺农业工程学院 2018
[6]犬细小病毒病临床诊疗及主要病毒基因的克隆与表达[D]. 陈强.贵州大学 2017
[7]2014-2015年上海地区犬细小病毒分离鉴定及基因分型[D]. 唐井玉.安徽农业大学 2016
[8]鼠源单克隆抗体犬源化的研究[D]. 王正阳.贵州大学 2016
[9]保定市犬细小病毒病发病规律调查及病理指标变化的研究[D]. 刘金元.河北农业大学 2015
[10]抗CPV高免血清的制备及疗效观察[D]. 袁听.四川农业大学 2013
本文编号：3350280
【文章来源】：长春工业大学吉林省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CPV单克隆抗体亲和力测定
第3章结果21表3-1单克隆抗体特异性测定项目CPVVLPsCAVCCVCDV4H81.07N/AN/AN/A阳性对照1.137N/AN/AN/A阴性对照N/AN/AN/AN/AN/A：不适用，无结合反应。3.2鼠源CPV基因工程抗体的制备3.2.1鼠源CPV基因工程抗体可变区序列的获得提取4H8总RNA，反转录得到cDNA后，经RACE-PCR扩增获得抗体重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）的DNA片段，结果见图3.2。由图3.2可知，VH产物大小约800bp，VL产物大小约750bp，将两条特异条带切胶回收与载体连接送去测序。M，DL5000DNAmaker；1，VH；2，VL图3.2抗体可变区RACE-PCR3.2.2鼠源抗体可变区序列分区在NCBI网站上，用IgBLAST分析测序结果，与鼠源IgG比对，结果如图3.3所示。提取的两条序列中均有4个FR区和3个CDR区，证明成功提取出4H8抗体可变区序列。
抗体可变区序列分区
【参考文献】：
期刊论文
[1]抗犬细小病毒VP2蛋白单链抗体的制备与中和活性研究[J]. 李彤彤,宋彩玲,杨凯越,王文静,陈慧宇,刘明. 中国生物工程杂志. 2020(04)
[2]犬细小病毒研究进展[J]. 周宏专,苏霞,徐福洲,杨兵. 动物医学进展. 2019(12)
[3]双特异性抗体结构与作用机制研究进展[J]. 吕明,王军志,沈倍奋. 中国新药杂志. 2019(21)
[4]人源抗体制备及临床应用研究进展[J]. 陈秀秀,吴成林,周丽君. 中国生物工程杂志. 2019(10)
[5]江苏省扬泰地区犬细小病毒分子流行病学调查[J]. 王海燕,谢静,王涛,刘静,管远红,张斌,徐亚亚,曹明凤,崔乐遥,刘宗平. 中国动物检疫. 2019(10)
[6]双特异抗体的研究进展[J]. 叶金统,孟颂东,朱晓东. 生物工程学报. 2020(01)
[7]双特异性抗体药物在肿瘤治疗领域的研究进展[J]. 岳雅丽,尹骏,高向东,姚文兵. 中国药科大学学报. 2019(03)
[8]犬细小病毒国内外流行病学研究进展[J]. 孙明洁,董国英,张雪竹,胡桂学. 中国兽医学报. 2019(05)
[9]犬细小病毒通过促进ROS产生/线粒体损伤诱导宿主细胞的凋亡[J]. 王岩,张建楼,赵轶男,王晓敏,王猛,李笑然,仲飞. 河北农业大学学报. 2019(03)
[10]贵阳地区犬细小病毒NS1基因的克隆及序列分析[J]. 李世静,龙丹丹,嵇辛勤,黄梦秋,陈佳琪,廖政,王小兵. 黑龙江畜牧兽医. 2019(03)
博士论文
[1]利用烟草和豌豆瞬时表达抗aFGF单链抗体[D]. 王秀峰.东北师范大学 2015
硕士论文
[1]犬β干扰素的表达及其抗细小病毒复制的研究[D]. 黄梦秋.贵州大学 2019
[2]广西地区犬细小病毒的分子流行病学调查研究[D]. 黄华旭.广西大学 2018
[3]抗猫细小病毒基因工程嵌合抗体研究[D]. 薛雨佳.中国农业科学院 2018
[4]犬细小病毒VP2蛋白免疫血清疗效研究[D]. 龙丹丹.贵州大学 2018
[5]10株犬猫细小病毒的分离鉴定及NS1和VP2基因遗传变异分析[D]. 田彤彤.仲恺农业工程学院 2018
[6]犬细小病毒病临床诊疗及主要病毒基因的克隆与表达[D]. 陈强.贵州大学 2017
[7]2014-2015年上海地区犬细小病毒分离鉴定及基因分型[D]. 唐井玉.安徽农业大学 2016
[8]鼠源单克隆抗体犬源化的研究[D]. 王正阳.贵州大学 2016
[9]保定市犬细小病毒病发病规律调查及病理指标变化的研究[D]. 刘金元.河北农业大学 2015
[10]抗CPV高免血清的制备及疗效观察[D]. 袁听.四川农业大学 2013
本文编号：3350280
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