透明质酸降解菌的筛选及其裂解酶的研究
发布时间：2021-09-03 05:37
透明质酸是一种存在于生物体内的大分子糖胺聚糖,透明质酸寡糖具有一定的生物免疫活性、良好的抗氧化性,有促进组织血液流动、血管生成和创伤愈合等功能。透明质酸酶是一类糖苷酶,能将透明质酸降解成小分子透明质酸寡糖,是制备透明质酸寡聚糖的有效方法,开发活性高、性质优良的新型透明质酸酶以及获得具有生物活性的透明质酸寡聚糖具有重要的研究意义。本研究从土壤中筛选出透明质酸高降解活性菌株,获得透明质酸裂解酶,并将该酶进行异源表达、纯化、功能及酶学性质研究,主要研究内容和结果如下:1.透明质酸降解菌的筛选和鉴定通过控制碳源富集、浊度法初筛、比色法复筛,从80份土壤、淤泥样品中分离出13株具有降解透明质酸的活性细菌,进一步通过在相同发酵条件下产酶、测定并比较各个菌株酶活,最终挑选出活性最高的菌株BN3-1。对BN3-1进行16S rDNA系统进化树分析以及细菌生理生化反应实验,最终确定该菌株为弗氏柠檬酸杆菌,将其命名为YNLX,并保存于云南大学云南省微生物研究所菌种保藏中心,保藏编号为YMF3.01173。2.菌株YNLX透明质酸裂解酶的克隆及异源表达通过对菌株YNLX进行基因组测序分析,发掘到一个透明质酸...
【文章来源】：云南师范大学云南省
【文章页数】：115 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
6SrDNA系统进化树
第3章重组透明质酸裂解酶的异源表达45表3.3YNLX基因组结构预测统计Table3.3ThestatisticsofgenomicstructurepredictionofYNLX类型数目长度(bp)%GenometRNA866,7410.1416SrRNA812,2270.2523SrRNA823,2020.475SrRNA91,0350.02CDS4,6324,420,79488.61CRISPR000GenomicIsland388,1251.773.3.1.2基因组圈将基因组测序深度、GC分布、GC-skew以及基因组结构注释进行整合，绘制核基因组圈图如图3.1。图3.1YNLX的核基因组圈图Figure3.1NucleargenomecirclediagramofYNLX注：由外到内依次是，编码基因(正义链)、编码基因(负义链)、tRNA(橙色)和rRNA(紫色)、CRISPR(蓝色)和基因岛(绿色)、GC比、GC-skew、测序深度Note:Fromtheoutsidetotheinside,itisthecodinggene(sensestrand),codinggene(negativesensestrand),tRNA(orange)andrRNA(purple),CRISPR(blue)andgeneisland(green),GCratio,GC-skew,sequencingdepth
第3章重组透明质酸裂解酶的异源表达47CTD45460.1)活性氨基酸位点分别是467、517和526位；无乳链球菌(S.agalactiae)透明质酸裂解酶(GenbankID：SQG26488.1)活性氨基酸位点分别是；523、573和582位；乳房链球菌(S.uberis)透明质酸裂解酶(GenbankID：SQG46732.1)活性氨基酸位点分别是553、603和612位；缓慢芽孢杆菌(Bacilluslentus)透明质酸裂解酶(GenbankID：SQI53822.1)活性氨基酸位点分别是468、518和527位。上述酶序列的活性位点氨基酸均是天冬酰胺、组氨酸和酪氨酸。因此推测与目的透明质酸裂解酶序列对应的位点，分别是234位的天冬酰胺、284位的组氨酸和293位的酪氨酸便是该酶的活性氨基酸位点。通过在线对目的透明质酸裂解酶氨基酸序列的信号肽进行预测，分析结果如图3.3，蛋白序列1~20位氨基酸为该酶的信号肽。图3.2不同透明质酸裂解酶氨基酸序列比对结果Figure3.2Aminoacidsequencealignmentofhyaluronatelyases
【参考文献】：
期刊论文
[1]秋葵多糖提取及抗氧化性的研究进展[J]. 张亚楠,董旭然. 现代农村科技. 2019(10)
[2]发酵透明质酸寡糖兽疫链球菌工程菌株的构建[J]. 韦朝宝,堵国成,陈坚,康振. 生物工程学报. 2019(05)
[3]虾青素抗氧化能力研究进展[J]. 江利华,柳慧芳,郝光飞,刘晓星,王红霞,徐建中,赵山山. 食品工业科技. 2019(10)
[4]大菱鲆鱼皮透明质酸酶的提取及酶学特性研究[J]. 王鹏,郭丽,甘文山. 食品工业. 2018(12)
[5]透明质酸水凝胶的药理作用及其临床应用研究进展[J]. 张,郭玫,王志旺. 甘肃科技. 2018(23)
[6]晋中地区鸡致病性大肠杆菌分离株的鉴定及其16S rDNA序列的同源性分析[J]. 尹姣姣,何敏,翟晶晶,韩丽娟,牛露露,牛宏泽,程倩倩,车雨彤,尹梦颖,张鼎,宁官保,田文霞. 中国兽医科学. 2019(03)
[7]硫酸软骨素二糖对疲劳致小鼠肾脏炎症的改善作用[J]. 刘芳,曹婉秀,李兆杰,薛长湖,唐庆娟. 食品工业科技. 2018(18)
[8]透明质酸酶在透明质酸软组织填充并发症治疗中的应用[J]. 陈筑昕,蒋承安,刘凯. 组织工程与重建外科杂志. 2017(03)
[9]酶法制备硫酸软骨素寡糖及其抗氧化活性[J]. 张静,张京良,朱常亮,姜言晖,沈照鹏,江晓路. 食品工业科技. 2017(13)
[10]VITEK 2 Compact系统的应用及鉴定结果分析[J]. 杨晶,王伟欢. 中国卫生检验杂志. 2016(18)
博士论文
[1]一种硫酸软骨素E降解抗性的糖胺聚糖裂解酶的鉴定与应用[D]. 彭春娥.山东大学 2018
[2]海洋细菌来源的新型糖胺聚糖降解酶的筛选、鉴定与应用[D]. 王文爽.山东大学 2017
[3]芽孢杆菌Bacillus sp.A50透明质酸酶的研究[D]. 郭学平.山东大学 2014
硕士论文
[1]硫酸软骨素的降解及其产物的抗氧化活性研究[D]. 邹籽华.西北大学 2019
[2]鱼鳔类肝素的提取分离、结构表征及活性评价[D]. 周斯仪.广东海洋大学 2019
[3]透明质酸寡糖促进糖尿病大鼠伤口愈合的研究[D]. 王一.锦州医科大学 2017
[4]透明质酸四糖和六糖的制备及生物活性研究[D]. 吕梦娴.江南大学 2016
[5]透明质酸酶的表达及酶法制备低聚透明质酸[D]. 张海洋.天津科技大学 2016
[6]22株无乳链球菌的鉴定以及温度对其溶血价和透明质酸酶活性的影响[D]. 蒙爱云.海南大学 2016
[7]重组透明质酸酶的表达、纯化及其酶学性质研究[D]. 陈怡斐.上海应用技术学院 2016
[8]产透明质酸酶菌株的筛选及发酵条件的优化[D]. 薛蔚.山东大学 2015
[9]基于分子改造和发酵优化提高透明质酸酶的表达[D]. 张娜.江南大学 2015
[10]噬尼古丁节杆菌产透明质酸酶条件优化及酶学性质研究[D]. 苏康.山东大学 2014
本文编号：3380515
【文章来源】：云南师范大学云南省
【文章页数】：115 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
6SrDNA系统进化树
第3章重组透明质酸裂解酶的异源表达45表3.3YNLX基因组结构预测统计Table3.3ThestatisticsofgenomicstructurepredictionofYNLX类型数目长度(bp)%GenometRNA866,7410.1416SrRNA812,2270.2523SrRNA823,2020.475SrRNA91,0350.02CDS4,6324,420,79488.61CRISPR000GenomicIsland388,1251.773.3.1.2基因组圈将基因组测序深度、GC分布、GC-skew以及基因组结构注释进行整合，绘制核基因组圈图如图3.1。图3.1YNLX的核基因组圈图Figure3.1NucleargenomecirclediagramofYNLX注：由外到内依次是，编码基因(正义链)、编码基因(负义链)、tRNA(橙色)和rRNA(紫色)、CRISPR(蓝色)和基因岛(绿色)、GC比、GC-skew、测序深度Note:Fromtheoutsidetotheinside,itisthecodinggene(sensestrand),codinggene(negativesensestrand),tRNA(orange)andrRNA(purple),CRISPR(blue)andgeneisland(green),GCratio,GC-skew,sequencingdepth
第3章重组透明质酸裂解酶的异源表达47CTD45460.1)活性氨基酸位点分别是467、517和526位；无乳链球菌(S.agalactiae)透明质酸裂解酶(GenbankID：SQG26488.1)活性氨基酸位点分别是；523、573和582位；乳房链球菌(S.uberis)透明质酸裂解酶(GenbankID：SQG46732.1)活性氨基酸位点分别是553、603和612位；缓慢芽孢杆菌(Bacilluslentus)透明质酸裂解酶(GenbankID：SQI53822.1)活性氨基酸位点分别是468、518和527位。上述酶序列的活性位点氨基酸均是天冬酰胺、组氨酸和酪氨酸。因此推测与目的透明质酸裂解酶序列对应的位点，分别是234位的天冬酰胺、284位的组氨酸和293位的酪氨酸便是该酶的活性氨基酸位点。通过在线对目的透明质酸裂解酶氨基酸序列的信号肽进行预测，分析结果如图3.3，蛋白序列1~20位氨基酸为该酶的信号肽。图3.2不同透明质酸裂解酶氨基酸序列比对结果Figure3.2Aminoacidsequencealignmentofhyaluronatelyases
【参考文献】：
期刊论文
[1]秋葵多糖提取及抗氧化性的研究进展[J]. 张亚楠,董旭然. 现代农村科技. 2019(10)
[2]发酵透明质酸寡糖兽疫链球菌工程菌株的构建[J]. 韦朝宝,堵国成,陈坚,康振. 生物工程学报. 2019(05)
[3]虾青素抗氧化能力研究进展[J]. 江利华,柳慧芳,郝光飞,刘晓星,王红霞,徐建中,赵山山. 食品工业科技. 2019(10)
[4]大菱鲆鱼皮透明质酸酶的提取及酶学特性研究[J]. 王鹏,郭丽,甘文山. 食品工业. 2018(12)
[5]透明质酸水凝胶的药理作用及其临床应用研究进展[J]. 张,郭玫,王志旺. 甘肃科技. 2018(23)
[6]晋中地区鸡致病性大肠杆菌分离株的鉴定及其16S rDNA序列的同源性分析[J]. 尹姣姣,何敏,翟晶晶,韩丽娟,牛露露,牛宏泽,程倩倩,车雨彤,尹梦颖,张鼎,宁官保,田文霞. 中国兽医科学. 2019(03)
[7]硫酸软骨素二糖对疲劳致小鼠肾脏炎症的改善作用[J]. 刘芳,曹婉秀,李兆杰,薛长湖,唐庆娟. 食品工业科技. 2018(18)
[8]透明质酸酶在透明质酸软组织填充并发症治疗中的应用[J]. 陈筑昕,蒋承安,刘凯. 组织工程与重建外科杂志. 2017(03)
[9]酶法制备硫酸软骨素寡糖及其抗氧化活性[J]. 张静,张京良,朱常亮,姜言晖,沈照鹏,江晓路. 食品工业科技. 2017(13)
[10]VITEK 2 Compact系统的应用及鉴定结果分析[J]. 杨晶,王伟欢. 中国卫生检验杂志. 2016(18)
博士论文
[1]一种硫酸软骨素E降解抗性的糖胺聚糖裂解酶的鉴定与应用[D]. 彭春娥.山东大学 2018
[2]海洋细菌来源的新型糖胺聚糖降解酶的筛选、鉴定与应用[D]. 王文爽.山东大学 2017
[3]芽孢杆菌Bacillus sp.A50透明质酸酶的研究[D]. 郭学平.山东大学 2014
硕士论文
[1]硫酸软骨素的降解及其产物的抗氧化活性研究[D]. 邹籽华.西北大学 2019
[2]鱼鳔类肝素的提取分离、结构表征及活性评价[D]. 周斯仪.广东海洋大学 2019
[3]透明质酸寡糖促进糖尿病大鼠伤口愈合的研究[D]. 王一.锦州医科大学 2017
[4]透明质酸四糖和六糖的制备及生物活性研究[D]. 吕梦娴.江南大学 2016
[5]透明质酸酶的表达及酶法制备低聚透明质酸[D]. 张海洋.天津科技大学 2016
[6]22株无乳链球菌的鉴定以及温度对其溶血价和透明质酸酶活性的影响[D]. 蒙爱云.海南大学 2016
[7]重组透明质酸酶的表达、纯化及其酶学性质研究[D]. 陈怡斐.上海应用技术学院 2016
[8]产透明质酸酶菌株的筛选及发酵条件的优化[D]. 薛蔚.山东大学 2015
[9]基于分子改造和发酵优化提高透明质酸酶的表达[D]. 张娜.江南大学 2015
[10]噬尼古丁节杆菌产透明质酸酶条件优化及酶学性质研究[D]. 苏康.山东大学 2014
本文编号：3380515
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